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第一部分建立毛细管电泳-化学发光法检测玉米中的伏马菌素B1目的:建立使用免疫亲和柱纯化和富集、毛细管电泳-化学发光法检测伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)的系列方法,并将该方法应用于玉米中的FB1检测。方法:1将FB1标准储备液用双蒸水逐级稀释成浓度为100.0μg/ml、50.0μg/ml、25.0μg/ml、10.0μg/ml、1.0μg/ml标准系列溶液,对检测条件进行选择和优化。2用乙腈:甲醇:水(1:1:2)提取玉米样品中的FB1。用FB1免疫亲和柱纯化处理,用毛细管电泳-化学发光法检测玉米中FB1含量。结果:1基于FB1对鲁米诺-三价银化学发光体系有抑制作用的事实,结合毛细管电泳分离技术,对检测方法进行优化,优化发光条件为:电泳缓冲溶液为5.0×10-3mol/L硼砂,鲁米诺浓度为2.0×10-3mol/L,Ag(Ⅲ)浓度为3.0×10-5mol/L溶于0.01mol/L氢氧化钠溶液;2在最佳检测条件下,FB1的线性范围为1.0200.0μg/ml,检出限(S/N=3)为1.0μg/ml。其回归方程为:Y=111.96368c+2.96493,相关系数为0.998。对200μg/ml的FB1进行8次平行测定,其出峰时间和峰高的相对标准偏差(n=8)分别为2.64%和7.86%。做3个样品的加标回收率实验,平均回收率为86.37%,变异系数为7.43%。结论:本实验应用毛细管电泳-化学发光法检测玉米中FB1,操作简便、检测快速、结果准确可靠,将其应用于玉米中FB1的测定,结果满意。第二部分伏马菌素B1和杂色曲霉毒素对细胞的联合毒性及氧化损伤目的:本实验探究FB1和杂色曲霉毒素(sterigmatocystin,ST)的联合处理对大鼠肝细胞的损伤,并应用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)3种指标对细胞内的蛋白氧化损伤水平进行验证。方法:1采用CCK-8细胞存活率实验,确定FB1和ST的联合染毒剂量,并应用所得的5个毒素混合浓度进行后续试验。2应用金正均法计算合并效应相关系数q,确定两种毒素相互作用类型。3对两种毒素的细胞毒性与细胞氧化损伤的相关性进行分析说明。4实验每一步结果均由3次独立重复实验验证后得出。结果:1 FB1可使细胞存活率随着浓度的增加细胞存活率明显下降,存在剂量依赖关系(相关系数r=0.990,p=0.001),ST处理48h后可引起细胞存活率下降,且随浓度增加,其毒性作用明显增强,存在剂量依赖关系(相关系数r=0.989,p=0.001)。两种毒素单独和联合作用均显著降低了细胞活力,并呈剂量依赖;2 FB1和ST联合作用48h后,计算其联合系数为q1=1.77、q2=2.01、q3=2.81、q4=2.10,所以,当ST浓度为10μmol/L时呈协同作用,当ST浓度增大,达到20.0μmol/L、40.0μmol/L、80.0μmol/L时,均呈显著增强作用;3两种毒素联合作用时,细胞毒性和细胞氧化损伤表现出明显的关联作用。结论:1 FB1和ST单独作用时均具有细胞毒性,并且随着毒素浓度的增加而增大,且呈剂量依赖关系。2 FB1和ST的联合作用是协同或显著增强作用,同时应用两种毒素处理细胞增加了对大鼠肝细胞损伤的程度。3 FB1和ST对大鼠肝细胞有氧化损伤作用。