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在实验室条件下,将罗非鱼死鱼装入5L带扣保鲜盒,按鱼水比1:1加入蒸馏水,同时按死鱼体重的1%、2%、3%接种乳酸菌、酵母菌、复合菌(乳酸菌和酵母菌的等量混合物),在室外和室内条件下处理28天、低温条件下处理35天。探索在不同温度、加菌量和菌种的不同组合对死鱼发酵液中总氮、氨氮、总磷、可溶性磷酸盐、硝酸氮、主要酶活力以及五种菌落数的影响差异。得出了最佳的罗非鱼死鱼处理方案。在最佳发酵组合中酶活性、无机离子浓度和菌落存在相关性,既可以表征不同发酵阶段,又可以作为衡量发酵无害化程度的指标。具体试验结果如下: 1、发酵过程中,各组合发酵液的温度均比外界环境温度高1-2℃。随发酵时间推移,发酵液pH值下降,死鱼经发酵后pH值偏酸性,发酵后pH为6.5-5.5不等。环境温度对分解速度影响显著,室外高温14天发酵基本完成(未见完整鱼肉),而室内常温需要21天,低温发酵需要28.35天。随着发酵的进行,发酵液的表观、颜色及臭味都发生了明显的改变:发酵期间,在发酵液表面出现白色漂浮物。发酵初始发酵液清澈无色腥臭;发酵中期发酵液转为粘稠黑色且带有强烈的刺激性臭味,在第14天粘度最大;发酵末期颜色最黑但不如中期粘稠,气味趋于平淡微臭。 2、随发酵时间延长,发酵液中各无机离子(总氮、可溶磷、总磷、氨氮、硝酸氮)含量均先增加,后趋于稳定。无机离子浓度变化可以在一定程度上指示发酵速度的差异。不同因素对无机离子浓度影响程度不同,依次为温度>加菌量>菌种。不同温度组别间,达到稳定的时间不同,室外组14天,室内组21天,低温组需要28天以上。表明,提高发酵温度,可以加快发酵速度。温度优劣为室外>室内>低温;加菌量提高,发酵速度会加快;菌种为复合菌>酵母菌>乳酸菌;总体而言,试验最优组合为:室外加2%复合菌。 3、发酵液中酶(蛋白酶、脲酶、过氧化氢酶)活性与无机离子浓度成正相关性。室外组在第7天最高,室内组第14天最高,低温组在第21天最高。温度、加菌量、菌种和天数对酸性磷酸酶活力变化的影响不大;范围为0.237-0.597。过氧化氢酶活性变化与前三种酶有一定差异。过氧化氢酶活力峰值分别在第7天和第28天出现,峰值分别为503.521和869.718。在蛋白酶、脲酶和过氧化氢酶活力最大的时候,发酵液中各无机离子浓度也处于升高的趋势。随后酶活力有显著的下降趋势,此期间各无机离子浓度处于平稳状态。由此可得,室外加2%复合菌使发酵液中主要酶活性和无机离子浓度值最大化。 4、发酵液中细菌数量最多,乳酸菌次之,酵母菌再次之,霉菌和放线菌最少。发酵第3天细菌数量最多,大约690 cfu/mL,之后显著下降持续到第7天,7天后又开始升高,第14天达峰值,数量为417 cfu/mL,随后又下降。乳酸菌数量变化的遵循先上升后下降的趋势,在14天达到峰值,大约384 cfu/mL。发酵过程中酵母菌、霉菌数量都呈下降的趋势,放线菌数量少,整个过程数量基本不变,其原因可能是加入乳酸杆菌后抑制了酵母菌、霉菌及放线菌的生长繁殖。由细菌趋势可知,在发酵初期细菌也受到了乳酸菌的抑制作用,在7天后利用发酵液中适合细菌生长的营养物质不断增多,细菌开始快速增殖,与乳酸菌达到了一种共生状态,它们一同在14天达到峰值,随后因为营养物质不断消耗,它们的数量开始逐渐减少。在室外加2%-3%复合菌发酵液中各种微生物数量均最多。这表明优化菌种组合,合适的发酵温度,适当提高加菌量有助于发酵顺利进行。 综合前述的各指标分析,得出加入2%复合菌,室外发酵14天的组合能加快发酵的进程。