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血管生成素(Angiogenin, ANG)具有促进血管生成和肿瘤细胞增殖的双重活性,与肿瘤的发生发展密切相关,但其作用的分子机制未明。由于蛋白质-蛋白质相互作用在生命活动中扮演着重要角色,因此研究ANG相互作用蛋白质是阐明ANG功能及分子机制的有效途径。本论文的第一部分运用免疫共沉淀与质谱技术在HeLa细胞中筛选到20个可能与ANG相互作用的蛋白质,其中包括了2个已知的ANG结合蛋白。通过对这20个蛋白质的功能注释和相互作用网络构建,发现其中4个蛋白质,即含IQ结构域的GTP酶激活蛋白(IQ motif containing GTPase activating protein 1, IQGAP1)、非肌型肌球蛋白重链(non-muscle myosin heavy chain 9, MYH9)、α-辅肌动蛋白4(alpha-actinin 4, ACTN4)及p-肌动蛋白(beta-actin, ACTB)与actin细胞骨架的调节及细胞粘附、迁移相关,并与Racl一起构成了一个与actin细胞骨架调节通路相关的ANG相互作用蛋白质子网络,提示ANG参与上述过程。随后利用免疫共沉淀技术证实,这4个蛋白质与ANG在HeLa细胞内的相互作用是真实的。由于actin骨架系统的运动与细胞粘附是细胞迁移的重要组成步骤,因此我们推测ANG很可能通过调节上述两个过程而调节了细胞的迁移。为了证实我们的猜想,第二部分首先利用免疫荧光技术检测了ANG与actin骨架蛋白在细胞中的共定位情况。结果表明,ANG与actin骨架蛋白结合于细胞-基质粘附所形成的黏着斑区域。随后,我们检测了ANG对细胞骨架及黏着斑形态、活性的影响。抑制内源ANG表达后,利用荧光标记的鬼笔环肽对F-actin进行染色以显示细胞骨架形态的变化；免疫荧光法标记黏着斑蛋白paxillin,检测黏着斑形态的变化；同时Western-blot法检测黏着斑激酶(FAK)磷酸化程度的改变。结果表明,ANG干扰后actin应力纤维显著增粗,黏着斑显著增大,但是数量减少,EGF促进的黏着斑激酶的活化受阻。最后,划线法实验结果表明,干扰内源ANG后EGF促进的细胞迁移速度减慢。综合以上结果,我们认为ANG很可能通过与actin骨架蛋白相互作用来调节actin骨架系统的运动与细胞粘附,最终影响细胞迁移能力。另一个得到验证的ANG结合蛋白为损伤DNA结合蛋白2(damage-specific DNA binding protein 2, DDB2),该蛋白在紫外诱导的DNA损伤修复中发挥作用,提示ANG也可能参与该过程。我们初步探索了紫外辐照刺激下ANG蛋白水平的变化及其对紫外诱导的细胞凋亡的影响。由于这部分结果较为初步,因此放在附呈现,进一步的研究正在进行中。综合研究结果,本论文创新地证明：1.ANG在HeLa细胞内与20个蛋白质有潜在的相互作用；2.ANG可在HeLa细胞内与IQGAP1、MYH9、ACTN4、ACTB及DDB2等相互作用；3.ANG与actin骨架蛋白在黏着斑位置相互作用,从而影响actin骨架和黏着斑形态及活性,促进EGF刺激的细胞迁移。