论文部分内容阅读
猪传染性胃肠炎(TGE)是由冠状病毒引起的高度接触传染性、季节性发病的一种肠道疾病,两周龄以下仔猪感染死亡率高达100%,给养猪业及相关产业带来巨大损失。在分类上猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)属冠状病毒科、冠状病毒属、第一群。它与同群的猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、犬冠状病毒(CCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)以及猫肠道冠状病毒(FECV)存在抗原相关性,PRCV在血清学上与TGEV存在交叉反应,容易引起误诊。本研究从病毒组织培养和抗体鉴别诊断两个方面进行了探讨,筛选出TGE病毒在组织细胞上培养的最适条件和特异性的鉴别诊断方法。猪传染性胃肠炎在国际动物贸易中是占据着重要地位,我国与国外签订的进出口猪检疫议定书中都要求对该病进行检测。因此开展这方面研究具有重要实际意义和广阔的应用前景。
其一、猪传染性胃肠炎(TGE)病毒在组织细胞上增殖对猪睾丸细胞(ST)、猪肾细胞(pk15)培养液不同配方进行比较研究发现,用含15%FBS的生长液进行细胞传代,含30%FBS生长液制备细胞悬液对细胞吸附、细胞单层形成以及TGEV细胞病变(CPE)判定都起到良好效果。当用15%胎牛血清(FBS)生长液传6-7代后,可以用15%FBS生长液进行传代并制备细胞悬液,既操作方便,又有良好效果。
在同等条件下,用ST,pk15细胞对两个批次TGE病毒分别增殖,检测毒价。结果表明无论是用细胞增殖病毒,还是测毒价,ST细胞均较pk15细胞对TGEV敏感且增殖效果好。在病毒增殖时ST细胞较pk15细胞高2个滴度以上(4*105.6/4*103.0,4*104.6/4*101.4),而在检测毒价时ST细胞较pk15细胞高1个滴度左右(4*105.6/4*104.6,4*103.0/4*101.4)。TGEV在ST、pk15细胞上CPE表现情况也验证了本试验结果。
在维护液中加一定量胰酶(每ml维护液加5ug)或增加血清含量对TGEV增殖效果影响不大,可忽略不计。
其二、猪传染性胃肠炎(TGE)病毒抗体的鉴定研究用血清中和试验(SN)和阻断酶联免疫吸附试验(B-ELISA)对来自美国、加拿大、丹麦的1401份血清进行比较检测。SN试验:41份阳性;B-ELISA试验:6份TGEV抗体阳性、35份PRCV抗体阳性。而且这41份阳性血清在两个试验中完全重合。这说明,用SN试验检测TGE病毒抗体,与PRCV抗体存在交叉反应,特异性不强。B-ELISA试验由于使用了单克隆抗体,能特异性检测、鉴定TGE抗体,进而区分TGE与PRCV感染。本研究成果已用于进出口动物政策制定,新签订议定书,要求用B-ELISA对TGE作最后鉴定,对过去签订的议定书进行了修订。