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目的TAM(Tamoxifen,他莫昔芬)是雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)的选择性调节剂,在用于治疗ER阳性乳腺癌患者过程中发现可增加子宫内膜增生和恶性肿瘤的风险,认为这与TAM在子宫膜组织中有弱雌激素样作用相关[1]。let-7g是内源性非编码RNA(MicroRNA,miRNA),近年来有研究证实其在恶性肿瘤的发生发展中具有重大作用。本研究以子宫内膜癌RL-95-2细胞为实验对象,拟观察不同浓度TAM作用下,细胞生长及let-7g的表达水平的变化,以探明TAM与let-7g之间的调控关系,并运用生物信息学方法和实验室手段,预测let-7g可能的靶基因,初步探讨TAM、let-7g在子宫内膜癌中的作用及可能的分子机制。为进一步认识子宫内膜癌的发病机理提供新的理论依据。方法1.采用免疫荧光技术检测细胞中ER表达。2.不同浓度TAM处理RL-95-2细胞后,采用CCK-8法检测吸光度值(OD值变化),观察TAM对细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞周期的变化,实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PolymeraseChain Reaction,RT-qPCR)法检测let-7g的表达变化。3.借助生物信息学软件预测let-7g的靶标基因并对其进行生物学功能分析。4.上调或下调let-7g表达:CCK-8法测定对细胞增殖的影响,RT-qPCR检测let-7g的表达及靶基因RB1mRNA表达,Western Blot检测RB1蛋白的表达水平。结果1.子宫内膜癌RL-95-2细胞中ER表达阳性。2.(1)与对照组相比,处理48h后浓度为1×10-7mol/L的TAM使细胞OD值增加(P <0.05),浓度为1×10-4mol/L的TAM使细胞OD值降低(P <0.05);处理72h后浓度为1×10-9~1×10-5mol/L的TAM使细胞OD值明显增高(P <0.05),在浓度为1×10-7mol/L时OD值最高(P<0.01),而当TAM浓度为1×10-4mol/L时细胞OD值降低(P <0.05)。(2)与对照组相比,1×10-7mol/L的TAM作用于RL-95-2细胞72h后,G0/G1期细胞明显减少,而S期细胞增多(P<0.05)。(3)与对照组相比,TAM浓度为1×10-9~1×10-5mol/L时,let-7g表达量较高(P<0.05),当TAM浓度为1×10-7mol/L时let-7g的表达量最高(P<0.01),1×10-4mol/L的TAM则使let-7g的表达下降(P<0.01)。3.经生物信息学的方法预测和分析,筛选出了6个与细胞生长密切相关的let-7g靶基因:UHRF2、RB1、GAS7、PLAGL2、NAB1和ZNF282,并着重对RB1进行了分析。4.上调细胞中let-7g表达,使OD值增加(P <0.05)、RB1蛋白的表达显著增高(P <0.01),下调细胞中let-7g细胞OD值降低(P <0.05),且使蛋白的表达显著降低(P <0.01),但对RB1mRNA表达无明显影响。结论适宜浓度的TAM对人子宫内膜癌RL-95-2细胞具有促增殖作用,促进细胞从G0/G1期进入S期,且这种作用可能是通过上调细胞中let-7g的表达,负性调控RB1的表达实现的。