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第一分部目的:通过网络药理学挖掘大黄素相关作用靶点、急性肾损伤的相关靶点。利用相关软件找出大黄素及急性肾损伤两者相交的靶点,并利用富集分析预测大黄素治疗急性肾损伤的相关信号通路。方法:利用TCMSP数据库、Pubchem数据库、Zinc数据库、Swiss Target Prediction数据库、STITCH数据库挖掘大黄素相关作用靶点。利用OMIN数据库、TTD数据库、GAD数据库、Di GSe E数据库挖掘急性肾损伤相关靶点,利用Cytoscape软件及Bisogenet插件、Cyto NCA插件构建蛋白网络互作,并挖掘出核心靶点,利用DAVID在线工具、Omicshare在线工具将核心靶点进行富集分析出相关信号通路。结果:利用药物成分数据库挖掘出与大黄素相关的靶点有37个,经过拓扑分析后得到2954个相关靶点。利用疾病数据库挖掘出与急性肾损伤相关的靶点有40个,经过拓扑分析后得到1804个相关靶点,经过Cytoscape分析后得到699个交集靶点,使用Cyto NCA分析最后得到242个核心靶点,将核心靶点富集分析后发现大黄素与急性肾损伤相关信号通路为内质网应激凋亡通路结论:(1)通过网络药理学发现大黄素与急性肾损伤相关靶点众多(2)富集分析发现大黄素治疗急性肾损伤与内质网应激引起的凋亡相关(3)网络药理学为进一步研究大黄素相关分子机制提供了新的方法学第二分部目的:研究大黄素对缺氧复氧模型(hypoxia/reoxygenation,H/R)人肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cell,HK-2)活力及凋亡的影响方法:建立H/R HK-2细胞模型,将其分为对照组(不建立模型),模型组(建立H/R模型),浓度梯度为10μM、30μM、50μM、80μM大黄素组(建立H/R模型),造模完成后加入不同浓度的大黄素,在造模完成后4h及12h加入CCK-8检测细胞活力,并根据CCK-8结果筛选出最适浓度进行后期实验。根据筛选的大黄素浓度,重新建立H/R HK-2细胞模型,并分为对照组、模型组、大黄素组,造模完成后在4h及12h用CFSE/PI方法检测HK-2细胞凋亡情况。结果:建立H/R HK-2细胞模型后4h及12h HK-2细胞活力明显下降,而浓度为10μM、30μM、50μM、80μM大黄素在造模后4h及12h均可以提高HK-2细胞活力,其中30μM浓度的大黄素对于提高HK-2细胞活力最明显,因此后期实验选取浓度为30μM的大黄素。建立H/R模型后4h及12h,HK-2细胞凋亡明显增加,而大黄素可以明显的抑制HK-2细胞的凋亡。结论:(1)建立H/R损伤模型可引起HK-2细胞活力下降及凋亡。(2)大黄素具有增加H/R HK-2细胞活力及抑制H/R HK-2细胞凋亡的作用。第三分部目的:研究大黄素对H/R HK-2细胞内质网应激相关凋亡通路的作用方法:建立H/R HK-2细胞模型,将其分为对照组,模型组,大黄素组,在造模完成后4h及12h,用实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测内质网应激标志性分子GRP78 m RNA及蛋白表达水平,及内质网应激下游相关分子CHOP、JNK、P53、caspase-12 m RNA及蛋白表达水平以及凋亡相关分子caspase-3、Bcl-2、caspase-9 m RNA及蛋白表达水平结果:建立H/R HK-2细胞模型后4h及12h引起GRP78、JNK、P53、caspase-12、促凋亡相关分子caspase-3、caspase-9表达的升高,而减少了抑制凋亡分子bcl-2的表达;大黄素可以抑制HK-2细胞JNK、P53、caspase-12、caspase-3、caspase-9的表达,同时提高bcl-2的表达。结论:(1)H/R模型可以引起HK-2细胞内质网应激,并引起下游通路caspase-12、JNK、P53的激活。(2)H/R模型可以引起HK-2细胞凋亡分子caspase-3、caspase-9的过表达,抑制性凋亡分子bcl-2表达的下降。(3)大黄素能够抑制H/R HK-2细胞内质网应激下游分子JNK、P53的过表达(4)大黄素能够抑制H/R HK-2细胞凋亡分子caspase-3、caspase-9的过表达及提高抑制性凋亡分子bcl-2的表达。