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目的本论文通过细胞实验研究LAPTM4B基因表达在胃上皮细胞系(GES-1)与幽门螺杆菌(H.pylori)共培养后的变化,胃上皮细胞系及胃癌细胞系(SGC-7901)内LAPTM4B基因表达变化对EMT标志蛋白分子及EGFR蛋白的影响,探讨LAPTM4B基因在H.pylori感染相关胃癌发生及胃癌进展中所发挥的作用及其机制。方法本论文第一部分研究胃上皮细胞系(GES-1)与幽门螺杆菌(H.pylori)共培养时LAPTM4B基因表达的变化及其与EMT标志蛋白分子、EGFR蛋白表达的关系。采用Western blot检测GES-1细胞系中1APTM4B-35蛋白、EMT标志蛋白分子(ZO-1、ZEB1、E-cadherin、β-catenin、Vimentin、Snail、Slug)及 EGFR 蛋白的表达水平。将GES-1细胞系与H.pylori.国际标准株26695进行体外共培养,采用 Western blot 检测 LAPTM4B-35 蛋白、EMT 标志蛋白分子(ZO-1、ZEB1、E-cadherin、β-catenin、Vimentin、Snail、Slug)及 EGFR 蛋白在不同的时间节点(Oh、12h、24h、48h)表达水平的变化。为研究LAPTM4B基因对EMT标志蛋白分子及EGFR蛋白表达的调控关系,通过基因转染技术上调GES-1细胞系中LAPTM4B基因表达水平,检测EMT标志蛋白分子及EGFR蛋白表达水平的变化;CCK-8实验检测细胞的增殖能力,Transwell迁移实验检测细胞运动能力的变化。为证实H.pylori是通过LAPTM4B基因调控EMT标志蛋白分子、EGFR蛋白的表达,在进一步实验中实施RNAi技术敲低LAPTM4B-35表达后进行H.pylori与GES-1细胞体外共培养,采用Western blot方法检测EMT标志蛋白分子及EGFR蛋白表达水平变化。本文第二部分研究LAPTM4B基因表达对EMT标志蛋白分子、EGFR蛋白表达的影响及其对胃癌细胞增殖能力、侵袭能力的影响。首先检测不同胃癌细胞系中LAPTM4B-35的表达水平,选取LAPTM4B-35表达水平高的细胞系进行敲低实验。鉴定转染成功后,Western blot检测EMT标志蛋白分子(ZO-1、ZEB1、E-cadherin、β-catenin、Vimentin、Snail、Slug)及 EGFR 蛋白表达水平的变化,CCK-8 实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果第一部分实验发现GES-1细胞系中LAPTM4B-35基础表达水平很低,在与H.pylori进行体外共培养后,其表达水平显著升高。EMT标志蛋白分子及EGFR蛋白表达在GES-1细胞及与H.pylori进行体外共培养后也发生显著变化,ZEB1、β-catenin、Vimentin、Snail、Slug 表达显著升高,而 ZO-1、E-cadherin 表达明显降低,EGFR蛋白表达升高。LAPTM4B基因过表达质粒转染成功后,GES-1细胞中ZEB1、β-catenin、Vimentin、Snail、Slug 表达显著升高,而 ZO-1、E-cadherin 表达明显降低,EGFR蛋白表达升高;CCK8实验显示细胞增殖能力增强、Transwell迁移实验显示细胞运动能力增强。GES-1细胞经siRNA有效敲低LAPTM4B基因表达后再与H.pylori共培养组与GES-1细胞与H.pylori共培养组相比较,EMT标志蛋白分子及EGFR蛋白表达水平存在显著差异。第二部分实验发现胃癌细胞系SGC-7901中LAPTM4B-35基础表达水平较高。SGC-7901细胞系经siRNA有效敲低LAPTM4B基因表达后再检测EMT标志蛋白分子及EGFR蛋白水平,发现ZEB1、β-catenin、Vimentin、Snail、Slug表达显著降低,而ZO-1、E-cadherin表达升高,EGFR蛋白表达降低;CCK8实验显示细胞增殖能力减弱,Transwell侵袭实验显示细胞侵袭能力减弱。结论1.LAPTM4 基因表达上调通过诱导细胞发生EMT,影响EGFR表达,可能参与H.pylori感染的致胃癌作用。2.LAPTM B基因表达上调通过参与细胞EMT发生,影响EGFR表达,促进胃癌的增殖、侵袭和转移,参与胃癌的进展过程。