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目的:测燃煤型地方性氟中毒病区人群髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)mRNA在外周血白细胞中的表达,分析MPO和CAT基因多态性变化,探讨其与燃煤型氟中毒发病机制的相关性,以及了解改灶和健康教育等综合干预措施后对病区人群的健康影响。 方法:选择贵州省毕节市燃煤型地方性氟中毒重病区人群,分干预组(已采取改灶和健康教育等综合干预措施)和非干预组(尚未采取有效干预措施),在贵州省长顺县非地方性氟中毒病区选择健康人群作为对照组。各组选择成人150例,空腹抽取静脉血,分离白细胞,并分别提取白细胞中RNA和DNA。采用实时荧光定量 PCR方法检测氟中毒非干预组、氟中毒干预组、及对照组人群外周血白细胞中MPO、CAT mRNA的表达;对MPO基因启动子区-463G/A位点进行功能学研究,PCR方法扩增出 MPO基因启动子区,克隆至萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,构建重组质粒pGL3-G、pGL3-A,并分别与海肾荧光素酶报告基因载体 pRL-TK瞬时转染至人肝癌细胞株(HepG2),利用双荧光素酶报告基因检测分析MPO基因启动子区-463G/A位点点突变对基因转录活性的影响;采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测CAT基因启动子区-262C/T、-21A/T位点的基因型。结果用SPSS13.0软件统计各组人群外周血白细胞中MPO和CAT mRNA的区别和分布频率,分析其与疾病的关联性。 结果:氟中毒非干预组人群外周血白细胞中MPO mRNA表达水平较对照组和干预组升高(P<0.05),而氟中毒干预组MPO mRNA表达水平与对照组无显著差异(P>0.05);氟中毒非干预组和干预组CAT mRNA表达水平较对照组显著降低(P<0.01),氟中毒非干预组与干预组之间CAT mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。成功构建MPO基因启动子重组质粒pGL3-G和pGL3-A,瞬时转染HepG2后,经双荧光素酶报告基因检测分析,MPO基因-463G/A位点发生遗传变异后,重组质粒 pGL3-G比 pGL3-A使报告基因荧光素酶表达增加了19%;氟中毒非干预组、干预组及对照组CAT-262C/T、CAT-21A/T多态的基因型频率分布符合Hardy-weinberg遗传平衡定律;三组之间,CAT-262C/T,CAT-21A/T基因型及等位基因频率在各组间均无统计学意义(P>0.05)。 结论:氟中毒非干预组MPO mRNA表达水平升高、CAT mRNA表达水平降低,表明地方性氟中毒病区人群氧化应激水平较正常对照人群升高;经过采取有效的综合干预措施后,MPO mRNA水平较非干预组明显降低,表明综合干预措施在防治地方性氟中毒方面有一定作用。 MPO-463位点G等位基因使MPO转录活性增高,提示MPO-463位点G→A突变可能使转录因子SP1失去结合位点;结合我们前期发现氟中毒组MPO酶活力及MPO-463G等位基因频率均高于对照组的研究结果,提示MPO基因A等位基因可能是燃煤型氟中毒的保护因素。 CAT基因启动子区-262C/T,-21A/T位点多态性与本研究所选择的燃煤型地方性氟中毒人群无明显相关性。