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目的:本课题采用单次长时程应激(single prolonged stress,SPS)作为创伤后应激障碍模型,综合行为学、化学遗传学方法、免疫荧光等技术手段观察杏仁核不同的神经元集群在大鼠PTSD样症状中的作用及相关神经生物学机制,旨在为开发新的PTSD临床治疗手段和方案提供理论依据。方法:首先,采用SPS模型进行造模,将SD大鼠随机分成未造模对照组,SPS模型造模后1d组,造模后14d组,利用旷场实验、高架十字迷宫实验检测大鼠PTSD的焦虑样行为改变,利用免疫荧光技术检测杏仁核的c-fos蛋白表达变化,并用c-fos来表征脑区的激活,探究杏仁核的激活在大鼠PTSD样行为发生中的作用。其次,采用化学遗传学方法,即DREADDs技术(designer receptors exclusively activated by designer drugs)来抑制杏仁核脑区,检测其是否影响PTSD的发生。通过脑区注射腺相关病毒,将改造的人M4毒蕈碱受体hM4Di表达在大鼠杏仁核CeA脑区,并通过腹腔注射hM4Di的配体氯氮平-N-氧化物(clozapine-N-oxides,CNO)来实现杏仁核的抑制。采用SPS模型进行造模,利用旷场实验、高架十字迷宫检测PTSD的焦虑样行为学改变,验证杏仁核参与PTSD样症状的发生。最后,利用免疫荧光技术检测BLA和CeA的c-fos表达变化,并用来表征其脑区激活;同时应用谷氨酸能神经元的分子标签CaMKII和GABA能神经元的分子标签GAD67和c-fos共标来表征不同的神经元集群的激活情况,探究相关机制。结果:1.同未经SPS造模的对照组大鼠相比较,SPS造模后14d的大鼠在旷场中央区和高架十字的开臂停留时间均显著的缩短(P<0.05),SPS造模后1d组没有明显差异,表明SPS可诱导大鼠产生延迟性的焦虑样行为。c-fos免疫荧光结果显示在CeA脑区,同未经SPS造模的对照组大鼠相比,造模14d后c-fos的表达含量增高(P<0.05),但是与造模后1d的大鼠相比,没有明显差异。而BLA脑区神经元集群的激活模式未发现任何显著性改变。2.利用DREADD技术抑制杏仁核CeA脑区,同其他未干预组相比,SPS造模后14d大鼠在旷场中央区和高架十字的开臂停留时间均显著的增加(P<0.05),表现出抗焦虑。3.大鼠在SPS模型后,在免疫荧光技术检测试验中,GAD67+c-fos阳性/c-fos阳性的比值显示在CeA脑区,同未造模动物相比,造模14天后GAD67+c-fos阳性/c-fos阳性的比值明显增高[F(2,16)=13.06,P<0.001,],有统计学意义,但是造模后第1天没有表现明显差异,而BLA脑区GABA能神经元集群的激活模式未发现任何显著性改变。CaMKⅡ+c-fos阳性/c-fos阳性的比值显示在CeA脑区和BLA脑区,谷氨酸能神经元集群的激活模式都未发现任何显著性改变。结论:1.大鼠PTSD样行为的发生同时伴随有中央杏仁核的激活,这可能参与了PTSD发生。2.大鼠中央杏仁核CeA脑区的抑制,出现抗焦虑作用,中央杏仁核参与PTSD的发生。3.中央杏仁核的GABA能神经元的激活比例的失调很可能参与了PTSD样行为的发生。其因果联系需要进一步的化学遗传学进一步证明。