论文部分内容阅读
饱和脂肪酸含量的增加能引起哺乳动物肝细胞发生内质网应激、炎症、凋亡等反应,是导致脂肪肝病变的原因之一。硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)作为饱和脂肪酸去饱和的关键酶,在缓解脂肪肝病变中具有关键作用。SCD1在鹅中的表达丰度和基因组拷贝数显著高于哺乳动物,推测SCD1在保护鹅肥肝脂肪代谢过程中发挥重要作用,然而,目前对SCD1在鹅肝饱和脂肪酸耐受性中的作用研究还未见报道。本研究利用不同浓度的棕榈酸处理鹅肝细胞,并以人正常肝细胞系LO2细胞作为参照,通过MTT检测鹅肝细胞对棕榈酸的最大耐受浓度,利用荧光定量PCR(qPCR)对内质网应激、炎症、细胞凋亡相关基因表达量变化情况进行检测,对鹅肝细胞的棕榈酸耐受能力进行评价;同时干扰SCD1探究其在鹅肝细胞对棕榈酸耐受中的作用及其作用途径。主要研究结果如下:(1)鹅肝细胞对棕榈酸的最大耐受浓度为0.6mM,而人肝细胞对棕榈酸的最大耐受浓度低于0.2mM。(2)在0.6mM棕榈酸处理下,鹅肝细胞内质网应激相关基因(XBP、BIP、ATF6)、炎症反应相关基因(IL-6、IL-1β、IFN-γ)、细胞凋亡相关基因(Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9)mRNA表达量均与对照组差异不显著,而LO2细胞内以上基因mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05)。(3)在0.6mM棕榈酸处理下,油红O结果显示鹅肝细胞与LO2细胞的脂滴沉积量在处理组和对照组间差异不显著;鹅肝细胞中脂肪酸去饱和相关基因SCD1、FADS1、FADS2的mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05),而LO2细胞中以上三个基因mRNA水平与对照组差异不显著;脂肪酸延长酶相关基因ELOVL6在两种细胞中mRNA表达量均较对照组显著增加(P<0.05);甘油三酯合成相关基因DGAT2的mRNA表达量在两种细胞中与对照组差异不显著。(4)在0.6mM棕榈酸处理下,干扰SCD1鹅肝细胞对棕榈酸的耐受能力显著降低(P<0.05);同时,炎症因子(IL-6、IL-1β)mRNA表达量较对照组显著增加,细胞色素c蛋白表达量、细胞凋亡率均显著增加(P<0.05);然而,内质网应激相关基因(XBP、BIP、ATF6)、炎症因子IFNG、细胞凋亡相关基因(Bax、Bcl-2、Caspase3、Caspase 9)mRNA表达量与对照组差异不显著。(5)在0.6mM棕榈酸处理下,干扰SCD1使通路关键基因AKT1、AKT2、FOXO1、SIRT1的mRNA表达量较对照组显著增加,而mTOR、AMPK的mRNA表达量与对照组差异不显著;此外,干扰SCD1后,甘油三酯合成相关基因(FADS1、FADS2、ELOVL6、DGAT2)表达量与对照组无显著差异。综上,鹅肝细胞对棕榈酸具有较高的耐受性,其中原因之一为SCD1通过AKT/FoxO1、SIRT1/FoxO1通路调控炎症、细胞凋亡相关基因的表达,从而增加鹅肝细胞对棕榈酸的耐受能力。