【摘 要】
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该研究的目的就是要搞清楚nm23-H1抑制uPA/uPAR的表达是否可能通过这一信号通路.我们以人巨细胞肺癌高转移株(95D)细胞为研究对象,首先比较了具有相同遗传背景的人巨细胞肺癌
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该研究的目的就是要搞清楚nm23-H1抑制uPA/uPAR的表达是否可能通过这一信号通路.我们以人巨细胞肺癌高转移株(95D)细胞为研究对象,首先比较了具有相同遗传背景的人巨细胞肺癌高低转移株95D和95C细胞中nm23-H1、Tiam1及uPa/uPAR的表达差异,表明nm23-H1与其高转移能力呈负相关,而Tiam1及uPA/uPAR与其高转移能力呈正相关.然后应用PCR和RT-PCR的方法,构建了nm23-H1的正义、反义表达质粒及Tiam1反义表达质粒,将这些表达质粒稳定转染高低转移株95D细胞,筛选得到阳性克隆,经PCR、Western blot检测表明,目的基因组入细胞染色体并能在细胞内表达.检测Rac1的活性、uPa/uPAR的表达量及细胞培养上清中uPA及MMP-2/MMP-9的活性.结果表明,nm23-H1正义表达质粒和Tiam1反义表达质粒均能下调Rac1的活性,下调uPA/uPAR的表达,并下调uPA的分泌及细胞培养上清中uPa和MMP-2/MMP-9的活性,降低95D细胞的体外侵袭能力,增强95D细胞对纤连蛋白的粘附能力,而反义nm23-H1表达质粒的作用正相反.用免疫共沉淀的方法证实,在95D细胞中nm23-H1与Tiam1直接相互作用,因此根据以上结果推测nm23-H1可通过下调Tiam1-Rac1通路的活性,从而下调uPA/uPAR的表达,抑制细胞外基质和基底膜的降解,发挥抑制肿瘤侵袭转移的作用.
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