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目的利用两种啮齿类动物SD大鼠和金黄地鼠,建立三种高脂血症动物模型,分别是混合型高脂血症模型、高胆固醇血症模型和高甘油三酯血症模型。研究植物甾醇酯的降胆固醇作用,采用两种高胆固醇血症动物模型进行实验,在验证该模型的有效性和稳定性的同时,探讨植物甾醇酯的有效作用剂量和作用机制。方法1.高脂血症动物模型的建立1.1混合型高脂血症模型雄性健康成年SD大鼠20只,按体重和尾血TC随机分为空白对照组、模型组,每组10只。空白对照组给予基础饲料,模型组给予高脂饲料。高脂饲料配方是10%猪油、10%蛋黄粉、1%胆固醇和0.2%胆盐和78.8%基础饲料。每周记录体重和进食量,每周尾部取血测TG、TC;实验周期4周;实验结束,断头处死,解剖取肝脏称重测肝组织TC和TG含量。1.2高胆固醇血症模型雄性健康成年SD大鼠60只,雄性健康成年金黄地鼠20只。SD大鼠采取尾部取血,金黄地鼠为眼内眦取血,均按体重和血TC分为各配方组和空白对照组,每组10只。SD大鼠高胆固醇血症模型设计3种高脂饲料配方,分别为1)1%胆固醇、5%蛋黄粉和94%基础饲料;2)1%胆固醇、0.2%胆盐和98.8%基础饲料;3)5%猪油、1%胆固醇、0.2%胆盐和93.8%基础饲料。金黄地鼠高胆固醇血症饲料配方为0.2%胆固醇和99.8%基础饲料。配方组给予高脂配方饲料,空白对照组给予基础饲料;实验周期4周,每周记录体重和进食量,SD大鼠每周尾部取血测TG、TC,金黄地鼠每2周眼内眦取血,血脂指标同SD大鼠。1.3高甘油三酪血症模型雄性健康成年SD大鼠70只,金黄地鼠20只。SD大鼠尾部取血,金黄地鼠眼内眦取血,均按体重和血TG分为配方组和空白对照组。SD大鼠高甘油三酯血症模型设计三种高脂饲料配方,分别为1)15%猪油、10%蔗糖和80%基础饲料;2)15%猪油、10%果糖和80%基础饲料;3)15%猪油和85%基础饲料。金黄地鼠高甘油三酯血症模型是将原为高胆固醇血症模型的空白对照组动物改给予含有20%猪油的饲料,原模型组动物改给予含有20%猪油和10%蔗糖的高脂饲料。实验周期6-8周,每周记录体重和进食量,每2周尾部或眼内眦取血测TG、TC、LDL-C或HDL-C,动态观察血脂变化。2.植物甾醇酯降胆固醇作用的动物实验雄性健康成年SD大鼠60只,雄性健康成年金黄地鼠70只。SD大鼠取尾血测血脂基础值,按体重和血TC分为空白对照组、模型组、4个剂量组,4个剂量组的植物甾醇酯含量为0.110g/kg BW、0.220g/kg BW、0.550g/kg BW和1.10g/kg BW;金黄地鼠直接按体重分为空白对照组、模型组、5个剂量组,5个剂量组的植物甾醇酯含量分别为0.25 g/kg BW、0.5g/kg BW、1.0 g/kg BW、2.0g/kg BW和4.0 g/kgBW。空白对照组给予基础饲料,SD大鼠模型组给予含有1%胆固醇、0.2%胆盐和98.8%基础饲料的高脂饲料,金黄地鼠模型组为0.2%胆固醇和99.8%基础饲料的高脂饲料;各剂量组给予含有相应植物甾醇酯剂量的饲料,实验周期12周。SD大鼠实验为每4周取尾血测TG、TC、LDL-C和HDL-C;金黄地鼠是实验结束时眼内眦采血,血脂检测指标同SD大鼠。两种动物实验均每周称体重和记录进食量。实验结束,先取血分离血清,并分装血清用于测Apo A I、Apo B、Apo E、OX-LDL、CETP;后断头处死,取肝脏、动脉弓和腹主动脉等脏器,用于测肝组织LDLR mRNA基因表达和组织病理检测。结论(1)成功建立两种高胆固醇血症动物模型,分别是由1%胆固醇、0.2%胆盐和98.8%基础饲料配方组成高脂饲料形成的SD高胆固醇血症模型;0.2%胆固醇和99.8%基础饲料配方组成高脂饲料形成的金黄地鼠高胆固醇血症模型。(2)以实验第2周体重增重排序和80%比例对15%猪油和10%蔗糖饲料配方饲料形成的动物模型进行筛选,优化SD高甘油三酯血症动物模型。(3)植物甾醇酯对金黄地鼠高胆固醇血症有降低作用,对SD大鼠高胆固醇血症没表现作用,提示金黄地鼠高胆固醇血症模型在评价降胆固醇功能方面优于SD大鼠。(4) 1.0g/kg BW植物甾醇酯剂量组始出现降低金黄地鼠血TC和LDL-C含量的作用,差异有统计学意义,提示剂量为1.0g/kg BW是植物甾醇酯降胆固醇的最小有效作用剂量。(5)本研究发现,在出现效应的血脂指标中,引起胆固醇酯降低效应的植物甾醇酯剂量是最低的,提示胆固醇酯是植物甾醇酯作用的敏感标志物。(6)本研究提示载脂蛋白B浓度降低和肝组织LDLR mRNA的基因表达增加是植物甾醇酯降低高胆固醇作用的机制之一。