论文部分内容阅读
由Sclerotinia sclerotiorum(Lib．)de Bary引起的菌核病是分布最广、危害最严重的油料、蔬菜等作物病害之一，但是对该病的抗病和致病机制的研究均欠深入。拟南芥具有基因组小、结构简单、形体小、生长周期短、繁殖系数高、自花授粉等优点，且其基因组全序列测定工作已于2000年12月完成。为此，我们以模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)为材料，摸索了抗菌核病突变体的筛选方法，筛选获得了一批突变体，对cipk23失活突变体进行了克隆和功能验证，取得了如下主要结果： 1．用草酸喷雾接种法、草酸平板筛选法、核盘菌喷雾接种法、核盘菌离体叶片接种法筛选拟南芥菌核病抗性增强突变体，结果表明用离体叶片接种法筛选是最好的。 2．用离体叶片法筛选了5万株拟南芥激活标签突变体。共筛选出菌核病抗性增强突变体50株；44株通过TAIL-PCR扩增获得T-DNA插入侧翼序列；34株测序比对获得有效序列。其中5株突变体M150、M138、M12、M833、Mc140的T-DNA为同一插入位点，均插在Atlg30270(calcineurin B-like calcium sensor(CBL)-interacting protein kinase 23)-Cipk23内部，故通称为CIPK23突变体。 3．分析发现这一突变体对盐更敏感，而且该性状属显性突变，故推测为T-DNA插入引起上下游基因增强表达所致；RT-PCR验证表明增强子下游基因Atlg30280表达量比野生型显著提高，其T-DNA插入失活突变体表现更感病，说明该基因最有可能在菌核病抗性增强中起作用。 研究结果为进一步研究植物对拟南芥抗菌核病机制奠定了良好基础。