不同浓度的纳米银对血管内皮及平滑肌细胞增殖性能的影响研究

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各类管腔支架(如冠状动脉血管支架)植入后的再狭窄以及肿瘤的生长与转移等问题均与相关细胞的过度增生有关。而有选择性地抑制细胞的增殖能够预防或减少此类情况的发生。银具有很强的抗菌抑菌特性,在临床医学上被广泛用作消炎抗菌剂,如烧伤敷料等。其应用形式包括银盐(如AgNO3),化合物银(如SD-Ag)和纳米银。在使用过程中发现银在灭菌的同时也会与细胞间发生相互作用。这意味着银可能可以用于抑制细胞的增生。为此,采用单体纳米银作为研究对象,研究纳米银对内皮细胞和平滑肌细胞增殖性能的影响,以期获得在较大的抑制平滑肌增殖的同时对内皮细胞的增殖影响较小的纳米银浓度,为纳米银在选择性抑制细胞增生方面的医学应用提供实验依据。本文采用MTT法、BCA蛋白测量法和Alamar Blue法研究了在0.015625mg/mL到0.25mg/mL范围内,纳米银浓度对体外培养的人体脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人体血管平滑肌细胞(HUASMC)增殖性能的影响,借助借助P检验,单因素方差分析和双因素方差分析法总结出纳米银的浓度因素和细胞种类因素对细胞增殖性能的影响规律,结合流式细胞仪测定细胞凋亡法进一步验证该实验规律的可靠性。为了分析造成两种不同细胞间差异性的增殖规律的原因,采用LDH法检测了纳米银的急性细胞毒性,用免疫荧光标记法研究了纳米银对细胞形态的影响,用紫外分光光度法、高分辨透镜电镜等研究了纳米银的吸附和团聚对细胞增殖性能的影响。实验结果表明:在所有纳米银浓度下,两种细胞的增殖都受到不同程度的抑制,且随着纳米银浓度的升高,均呈现出非线性增殖响应规律,且两种细胞间存在增殖响应差异。当纳米银浓度较低时HUASMC受到的抑制作用较明显,而纳米银浓度较高时HUVEC受到的抑制作用较为明显。当纳米银浓度为0.25mg/mL和0.015625mg/mL时两种细胞间的增殖差异最为明显。引起细胞增殖响应差异的原因不是来自于纳米银的急性细胞毒性,而是与细胞的培养环境中有关的纳米银的团聚和在细胞膜上吸附有一定的关系。
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