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自身免疫耐受是指免疫系统对自身抗原的特异性免疫无反应状态,是维持免疫自稳的重要机制。自身耐受主要是通过中枢耐受和外周耐受两大机制来维持。为了研究常见的自身免疫性疾病-系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)免疫耐受异常的机制及糖皮质激素对SLE免疫耐受机制的影响,本文首先对SLE患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)进行研究,并分别应用慢性移植物抗宿主病(cGVHD)诱导的SLE小鼠和自发的MRL/lpr狼疮小鼠,全面系统地探讨了自身免疫耐受机制异常在SLE发生中的作用。一、SLE患者外周免疫耐受机制异常为了探讨Treg和Foxp3与SLE发病的相关性,检测了SLE合并狼疮性肾炎患者经肾上腺糖皮质激素(简称激素)冲击治疗后外周血单个核细胞(PBMC)中Treg和相关基因Foxp3表达的变化。结果表明激素冲击治疗后的SLE患者Treg/CD4~+T比值高于正常对照组;Foxp3 mRNA水平表达与对照组差异不显著。Treg数量和功能的变化提示外周免疫耐受机制异常参与SLE患者的发病,激素可能通过提升Treg纠正外周免疫异常而对SLE起治疗作用。二、cGVHD诱导SLE模型免疫耐受机制异常和激素的治疗作用首先采用cGVHD诱导SLE狼疮模型,检测了该模型的发病相关指标、细胞和体液免疫功能。在此基础上,本实验采用激素治疗SLE小鼠模型,以探讨cGVHD诱导的SLE狼疮模型中枢和外周免疫耐受异常的机制。结果表明:1、SLE模型鼠中枢和外周免疫耐受机制异常参与其发病:胸腺异位基因唾液蛋白2(saliva protein 2,SP2)和组织蛋白酶L (cathepsin L,CTSL)的表达明显减弱,与SLE模型鼠的唾液腺炎及全身结缔组织病明显相关;胸腺和脾脏CD4~+CD25~+Treg/CD4~+T比值无明显降低,Foxp3明显减弱,但CTLA-4和GITR表达增加。说明Treg功能减弱而T细胞活化增强参与cGVHD诱导的SLE狼疮模型的发病。2、激素治疗后可部分恢复SLE模型鼠的免疫耐受异常:胸腺中SP2和CTSL表达有一定程度的恢复;胸腺和脾脏中CD4~+CD25~+Treg/CD4~+T无明显变化,Foxp3表达增强,但CTLA-4和GITR表达水平减弱。说明治疗后Treg功能增强而T细胞活化减弱,激素通过纠正中枢和外周免疫耐受的异常而发挥治疗作用。三、MRL/lpr鼠免疫耐受机制异常的研究为了了解MRL/lpr小鼠免疫耐受的缺陷,我们检测了10周龄MRL/lpr小鼠的相关症状,对其中枢和外周免疫耐受异常的机制进行了研究。结果表明:1、10周龄MRL/lpr小鼠,表现出和人类SLE相似的症状。2、MRL/lpr小鼠存在中枢耐受缺陷:胸腺多种异位基因,包括SP-2、CTSL、甲状腺球蛋白(TG)、C-反应蛋白(CRP)的表达水平明显下降,与SLE模型鼠的唾液腺炎、甲状腺炎及全身结缔组织病相关。胸腺CD4~+CD25~+Treg/CD4~+T数量和功能基因Foxp3与对照组无明显差别,而CTLA-4表达增强。3、MRL/lpr小鼠存在外周耐受的异常:脾脏淋巴细胞增殖缺陷,Th1/Th2失衡;CD4~+CD25~+Treg/CD4~+T无明显减少,模型组与对照组相比,Foxp3表达减少,CTLA-4表达增强,提示CD4~+CD25~+Treg在外周的功能缺陷参与其发病。综上, SLE患者存在外周免疫耐受异常,不论cGVHD诱导的SLE模型,还是MRL/lpr小鼠,都存在着中枢耐受和外周耐受机制的异常。基于SLE患者和动物模型的发病机制研究,将为人类SLE提供有效的预防和治疗方案奠定基础。