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目的:本研究通过构建不同维生素A（vitamin A,VA）水平的孤独症大鼠模型,探讨孕期开始的维生素A缺乏（vitamin A deficiency,VAD）是否影响子代大鼠小脑浦肯野细胞的数量及树突形态,进而影响子代大鼠的运动协调功能,并且初步探索这其中可能涉及的分子机制。方法:构建丙戊酸（valproic acid,VPA）诱导的孤独症模型:选取8w成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠,与普通成年雄鼠交配。在妊娠第12.5天,随机给予孕鼠VPA（600 mg/kg）或等量生理盐水腹腔注射,所产的雄性仔鼠分别为孤独症模型组（VPA组）和对照组（CON组）。合并VA缺乏（VAD）的孤独症模型的建立:选取3w雌性SD大鼠,随机分为VA正常（VA normal,VAN）和VAD组,分别给予VAN或VAD饲料喂养4周,取大鼠尾静脉血,高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）检测血清VA浓度,选出VA水平正常（≥1.05μmol/L）和VA水平缺乏（<0.70μmol/L）的雌鼠,与普通成年雄鼠交配。在妊娠第12.5天,给予所有孕鼠腹腔注射600 mg/kg VPA。VAN组孕鼠所产雄性仔鼠为VAN+VPA组,始终接受VAN饲料喂养。VAD组孕鼠所产的雄性仔鼠被随机分成两组,VAD+VPA组和VAS+VPA组。VAD+VPA组大鼠始终接受VAD饲料喂养;VAS+VPA组大鼠生后换作VAN饲料喂养,在生后（postnatal day,PND）第1天开始灌胃补充VA1周。各组仔鼠于PND 28进行爬杆实验;于PND 35进行悬绳实验;于PND 42进行旷场实验;于PND 43进行三箱实验;于PND 46进行转棒实验。完成行为学实验后,于8w龄时将子代大鼠处死,收集血清和小脑组织,使用HPLC测定大鼠血清VA浓度;定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction,q PCR）被用于定量分析大鼠小脑组织中RORα的m RNA表达水平;蛋白免疫印迹（Western blotting,WB）检测小脑组织RARα和RORα蛋白表达水平;高尔基染色检测大鼠小脑浦肯野细胞树突形态;免疫荧光法和激光共聚焦检测RORα和Calbindin在大鼠小脑中的分布情况;通过染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation,Ch IP）实验分析RARα与RORα基因的相互作用。双荧光素酶报告基因检测（dual-luciferase reporter assay）验证RARα对RORα的转录调控活性及结合区域。结果:（1）在旷场试验中,VPA组大鼠在自我梳理上花费的时间与CON组相比显著增多（P<0.05）,而在中央区探索的时间显著少于CON组（P<0.05）。在三箱实验中,VPA组大鼠在陌生鼠箱中停留的时间显著低于CON组（P<0.05）,但在玩具箱中停留的时间显著高于CON组（P<0.01）,在中间箱停留的时间与CON组无显著差异（P>0.05）。在爬杆试验中,VPA组大鼠较CON组大鼠花费更多的时间爬至底座（P<0.05）。在悬绳试验中,VPA组大鼠从悬绳上掉落的时间显著低于CON组大鼠（P<0.01）。在转棒试验中,VPA组大鼠在转棒上停留的时间显著低于CON组大鼠（P<0.01）。免疫荧光的结果显示在小脑第Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅹ小叶内,VPA大鼠的浦肯野细胞数目均显著低于CON组大鼠,改变最明显的是在第Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅹ小叶（P<0.001）。高尔基染色的结果显示,在PND56,VPA组大鼠浦肯野神经元的树突面积与CON组相比显著降低（P<0.05）;浦肯野神经元树突与同心圆的交点数在距离胞体100-130μm远处显著低于CON组（P<0.05）。与CON组相比,VPA组大鼠小脑RORα的m RNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。免疫荧光和激光共聚焦的实验证实VPA组的RORα与浦肯野神经元的特异性标记Calbindin在小脑存在共表达,并且这种共定位在VPA组也明显弱于CON组。（2）在PND1,PND7,PND14,PND28,PND42,PND56这几个时间点,VAD+VPA组大鼠的血清VA浓度均显著低于VAN+VPA组（P均<0.01）;VAS+VPA组大鼠在PND1时血清VA浓度与VAD+VPA组没有显著差异,但与VAN+VPA组相比显著降低（P<0.01）。从PND7开始VAS+VPA组大鼠在各个时间点血清VA浓度均显著高于VAD+VPA组（P<0.01）,与VAN+VPA组相比无显著差异（P>0.05）。在旷场试验中,VAD+VPA组大鼠在自我梳理上花费的时间与VAN+VPA组相比显著增加（P<0.01）,在中央区探索的时间显著少于VAN+VPA组（P<0.001）。与VAD+VPA组相比,VAS+VPA组在自我梳理上花费的时间有显著减少（P<0.01）,在中央区探索的时间显著增加（P<0.001）。与VAN+VPA组相比,VAS+VPA组在旷场试验中自我梳理时间和在中央区探索的时间均无显著差异（P>0.05）。在三箱实验中,VAD+VPA组大鼠在陌生鼠箱中停留的时间显著低于VAN+VPA组（P<0.01）但在玩具箱中停留的时间显著高于VAN+VPA组（P<0.01）,在中间箱停留的时间与VAN+VPA组无显著差异（P>0.05）。与VAD+VPA组相比,VAS+VPA组在陌生鼠箱中停留的时间显著增加（P<0.01）,而在玩具箱中停留的时间显著减少（P<0.01）。与VAN+VPA组相比,VAS+VPA组在各箱活动的时间无显著差异（P>0.05）。在爬杆试验中,VAD+VPA组大鼠较VAN+VPA组大鼠花费更多的时间爬至底座（P<0.05）。与VAD+VPA组相比,VAS+VPA组爬至底座的时间显著减少（P<0.05）;与VAN+VPA组相比,VAS+VPA组爬至底座的时间无显著差异（P>0.05）。在悬绳试验中,VAD+VPA组大鼠从悬绳上掉落的时间显著低于VAN+VPA组（P<0.001）。与VAD+VPA组相比,VAS+VPA组大鼠从悬绳上掉落的时间显著增加P<0.001);与VAN+VPA组相比,VAS+VPA组从悬绳上掉落的时间无显著差异（P>0.05）。在转棒试验中,VAD+VPA组大鼠在转棒上停留的时间显著低于VAN+VPA组大鼠（P<0.05）;与VAD+VPA组相比,VAS+VPA组大鼠在转棒上停留的时间显著增加（P<0.05）;与VAN+VPA组相比,VAS+VPA组在转棒上停留的时间无显著差异（P>0.05）。免疫荧光的结果显示在小脑部分小叶中,VAD+VPA组的浦肯野细胞数量明显少于VAN+VPA组,包括小叶I（P<0.01）、Ⅳ（P<0.001）、Ⅴ（P<0.05）、Ⅵ（P<0.05）和Ⅶ（P<0.01）。在上述的这些小叶中,VAS+VPA组的浦肯野细胞数量较VAD+VPA组显著增加。VAN+VPA和VAS+VPA组在各小叶的浦肯野细胞数量没有显著差异（P>0.05）。高尔基染色的结果显示,在PND56,VAD+VPA组大鼠浦肯野神经元的树突面积与VAN+VPA组相比显著降低（P<0.05）;与VAD+VPA组相比,VAS+VPA组大鼠浦肯野神经元的树突面积显著增加（P<0.05）;与VAN+VPA组相比,VAS+VPA组大鼠浦肯野神经元的树突面积无显著差异（P>0.05）。VAD+VPA组大鼠浦肯野神经元树突与同心圆的交点数在距离胞体70-110μm远处显著低于VAN+VPA组和VAS+VPA组（P<0.05）。VAD+VPA组大鼠小脑组织RARα和RORα蛋白表达水平均显著低于VAN+VPA组和VAS+VPA组（P<0.05）。Ch IP实验结果显示:在大鼠小脑组织中,RARα与RORα基因的启动子区2号预测位点结合增强,与VAN+VPA组和VAS+VPA组相比,VAD+VPA组的这种结合显著降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因检测显示RARα对RORα基因具有转录活性。结论:（1）VPA诱导的孤独症模型大鼠运动协调能力下降,部分小脑小叶内浦肯野细胞数目减少,同时伴有树突发育受损,表现为浦肯野细胞树突面积下降,浦肯野细胞树突分支复杂程度下降。（2）孕期开始的VAD加重ASD模型大鼠的运动协调障碍和小脑损伤。生后早期补充VA可显著改善VAD的孤独症模型大鼠的运动协调障碍和小脑损伤。VAD加重ASD模型大鼠运动协调障碍可能是由于RARα在小脑的表达下降,RARα与RORα基因启动子区域结合减少所致。