荧光裸小鼠脉络丛上皮细胞培养及其生物学特征研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chren1981
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目的:脉络丛上皮细胞除了分泌脑脊髓液,在中枢神经系统中其它作用知之甚少,对绿色荧光裸小鼠脉络丛上皮细胞进行原代培养,旨在开发出-种有自然荧光示踪特征的工具细胞,并对其生物学特性进行研究,为进一步研究提供便利。方法:解剖显微镜下提取裸小鼠脉络丛组织,机械分离成细胞团,在盛有20%胎牛血清DMEM(F12)培养基的多孔培养板中培养,3天后第1次换液,之后每2天半量换液,1周后每3天换液1次,细胞贴壁后用CCK-8及Ki-67测增殖活性,倒置荧光显微镜下观察细胞形态和密度,TTR、S100,GFAP,alpha-SMA和Nestin免疫细胞化学荧光染色对培养细胞类型进行鉴定。结果:培养的脉络丛上皮细胞稳定表达绿色荧光(EGFP),发出明亮的绿色荧光,在形态上呈多边形,伸展宽广,胞体大,几乎每个细胞都高表达脉络丛上皮细胞特异标志TTR,但不表达GFAP,alpha-SMA和Nestin,并且具有较强的增殖活性,在体外可连续传代7代。结论:本方法可成功培养表达TTR的绿色荧光裸小鼠脉络丛上皮细胞,稳定表达EGFP,有望作为具有自然示踪特征的工具细胞用于相关实验之中。
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