随着克氏原螯虾养殖业的迅猛发展,其病害越来越严重,病害已经成为制约克氏原螯虾产业健康发展的重要因素。2016年5月,湖北省潜江市某克氏原螯虾养殖场出现克氏原螯虾暴发性死亡现象,造成了严重的经济损失。患病虾四肢无力,反应迟钝,应激能力较弱,伏于池塘边沿或水草上陆续死亡。为厘清病因,本研究对患病虾进行了病原菌的分离和鉴定,通过毒力因子检测和多位点序列分型研究该菌毒力基因的分布并确定其分型地位。对人工感染后不同时期的虾组织进行病理学观察,探讨该菌对克氏原螯虾的致病机理。此外,本研究还开展了30种中草药抑菌、杀菌试验,以期为克氏原螯虾细菌性疾病的防控提供科学依据。具体研究结果如下:1.从患病克氏原螯虾肝胰腺中分离到一株优势菌,命名为QD160502。表型鉴定发现QD160502为短杆状革兰氏阴性菌,生理生化特性与维氏气单胞菌参考菌株基本一致。分子生物学鉴定结果表明菌株QD160502的16S r DNA(登录号为:KX585901)和gyr B序列(Gen Bank登录号:MN189983)与Gen Bank上维氏气单胞菌的同源性最高,系统发育分析显示QD160502与维氏气单胞菌聚为一支。回归感染后,试验虾表现出了与原感染虾相同的症状,并能分离到特性一致的菌株。药敏试验结果显示,该菌对恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、四环素、强力霉素、复方新诺明高度敏感;对青霉素、阿莫西林、链霉素、卡那霉素耐药。毒力相关基因扩增结果显示QD160502携带气溶素基因aer、细胞毒性肠毒素基因act和鞭毛蛋白基因fla。多位点序列分型研究结果表明菌株QD160502与意大利地区来源的克氏原螯虾源维氏气单胞菌聚在一起,表现出一定的同源性。2.组织病理学观察显示,克氏原螯虾在感染维氏气单胞菌后,肝胰腺、肠道与心脏等组织都出现了不同程度的病理损伤,且随感染时间呈现加深势态。在感染12 h后肝小管分泌细胞中出现内含棕色颗粒的转运小泡;感染24 h后肝小管间炎性细胞浸润,肠道结缔组织萎缩,心脏组织出现空泡样扩张;感染48 h后肝小管储存细胞与分泌细胞大量解体并空泡化,肠道上皮皱嵴减少,心肌空泡样扩张增加;感染72 h后肝小管和肠道上皮细胞坏死,且在心脏组织中发现透明血细胞聚集。3.本研究选用抑菌圈法和改良微量二倍稀释法测定了30种广谱抑菌中草药对克氏原螯虾源维氏气单胞菌的体外抑菌效果。结果显示:苏木、五倍子、地榆、乌梅这4味中药水提物的最小抑菌浓度MIC小于10 mg/m L,有显著的抑菌效果,其中苏木的抑菌和杀菌效果最强,MIC和最低杀菌浓度MBC均为0.98mg/m L;苦楝、石榴皮、桃皮、千里光等4味中药水提物的MIC为15.63-31.25mg/m L,抑菌效果良好;赤芍、杨梅根、枫杨等8味中药水提物具有一定的抑菌作用和杀菌作用,MIC和MBC在125-250 mg/m L之间。槟榔、博落回、紫草等14中草药抑菌效果较差或无菌效果。本研究筛选出有显著抑维氏气单胞菌效果的中草药,为克氏原螯虾健康养殖提供理论依据。