论文部分内容阅读
原发性肝癌(Primary hepatocellular carcinoma,HCC)是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。中医学认为,灸法具有较好的提高免疫力的作用,特别是对于“症瘕积聚”类肿瘤疾病有独特的优势。近代针学巨擘承淡安先生非常重视灸法,其弟子中国澄江学派侯马针灸医学研究所所长谢锡亮先生从医60余年,治病方法力求简便,提倡直接灸法,发现直接灸法防治各类重型肝病有显著疗效。因此,本研究着眼于给予癌前病变大鼠不同疗程艾灸治疗对肝癌细胞生长的不同干预效应。以癌前病变大鼠为研究对象,利用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、化学法等技术,观察肝俞穴直接灸过程中肿瘤生长,并重点观察癌前病变大鼠肝功能、血清肿瘤特异性生长因子(Tumor specific growth factor,TSGF)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor α,TNF-α)在各个时点含量的变化。揭示肝俞穴直接灸法防治HCC时效关系,以期进一步阐明灸法对原发性肝癌的作用机理。研究目的：本研究以腹腔注射二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)诱导HCC癌前病变大鼠为研究对象,给予大鼠不同疗程艾灸治疗,观察肝俞穴直接灸对癌前病变大鼠肝功能、血清TSGF和TNF-α在各个时点含量的变化。评价肝俞穴直接灸法防治HCC的生物学效应,并从细胞水平揭示其防治作用的机制。研究方法：清洁级wistar雄性大鼠60只。按随机数字表法将动物分为正常组(n=10)、模型组(n=20)、预防1组(n=15)和预防2组(n=15)。采用腹腔DEN法制备HCC模型。DEN溶于生理盐水,模型组、两预防组大鼠腹腔注射,每周两次,连续12周。两预防组自造模开始同时给予直接灸肝俞穴,左右肝俞同时施灸,5壮/穴,隔日一灸,分别给予10次(一疗程)和20次(二疗程)干预之后继续造模至12周。在造模开始前一天、造模开始后第20天、造模开始后第40天、造模第12周结束,四个时间为取血时间点。分别以化学法检测血清丙氨酸氨基转移酶(Alamine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Transaminase,AST)、γ-谷氨酰转肽酶(Glutamyl Transpeptidase GGT); ELISA法检测血清TSGF和TNF-α。研究结果：1.造模前：各指标各组无显著差异,基线数据整齐,具有可比性。2.预防第一疗程结束：模型组大鼠血清ALT,AST,GGT值与正常组相比显著升高(p<0.05)；预防1组大鼠血清ALT、AST值较模型组显著降低(p<0.05),血清GGT值较模型组有降低趋势,但未显示明显差异(p>0.05)；模型组大鼠血清中TSGF,TNF-α值较正常组明显升高(p<0.01)；预防1组TSGF,TNF-α值较模型组无显著性改变(P>0.05),但P值接近0.05,有降低趋势。3.预防第二疗程结束时,模型组大鼠血清ALT,AST,GGT值较正常组明显升高(p<0.05)预防2组大鼠血清ALT,AST,GGT值较模型组有降低趋势,但未显示明显差异(p>0.05)；模型组大鼠血清中TSGF,TNF-a值较正常组明显升高(p<0.05),预防2组TSGF、TNF-a值较模型组显著降低(p<0.05)。4.造模结束：造模结束时,模型组血清ALT,AST5GGT,TSGF,TNF-a值含量与正常组比较均显著升高(p<0.05)。研究结论：1.本实验使用的DEN诱模方法可行；2、直接灸肝俞穴能够降低HCC模型大鼠血清ALT,AST,GGT含量,可改善肝脏损伤,具有保护肝脏的作用。但未在疗程上体现出差异。3.直接灸可以有效降低大鼠血清中肿瘤标记物TSGF与TNF-a的表达,且两疗程比一疗程效果显著,初步提示直接灸“肝俞穴”可在一定程度上延缓DEN诱发HCC模型大鼠的癌前病变且疗程越长效果越好。4.直接灸对HCC癌前病变具有一定的预防作用,但并不能完全阻止病变的发生；连续两个疗程的直接灸对大鼠癌前病变的预防作用优于一疗程。由此可以认为直接灸“肝俞穴”对HCC模型大鼠肝脏损伤有显著的预防效应,且这种效应与疗程相关。