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目的:弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffused large B-cell lymphoma,DLBCL)均是我国和西方国家最常见的一类非霍奇金淋巴瘤的病理类型,约占成人NHL的三分之一左右。DLBCL异质性显著,在病理特征、组织学特征、免疫表型、遗传学特点、临床表现、生物学行为上千差万别,对治疗反应不一,预后也存在显著差异。尽管近二十年,利妥昔单抗的出现使该类患者的长期生存得到改善。但是,仍然有1/3左右的患者为难治性,最终复发。一旦疾病复发,患者对二、三线化疗方案多不敏感。大量研究表明肿瘤微环境是影响肿瘤发生、发展、治疗反应的重要因素。其中,作为肿瘤微环境的主要成分--肿瘤基质细胞与淋巴瘤细胞之间的相互作用深刻地影响着淋巴瘤细胞的生物学行为。但是,肿瘤基质细胞影响DLBCL细胞生长和耐药的机制仍未充分阐述。Micro RNAs(mi RNAs)是大小约21-23个碱基的非编码单链小分子RNA,在细胞的增殖、凋亡和细胞周期中发挥重要作用。多项研究表明许多类型的恶性肿瘤都涉及到mi RNAs的变化,其变化程度与肿瘤的预后密切相关。而且,研究提示mi RNAs还可能作为肿瘤治疗的新型分子靶标。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)家族是一类影响肿瘤表观遗传学改变的关键酶。HDACs参与肿瘤细胞生长与表达调控等诸多过程,成为表观遗传学中抗肿瘤药物设计的重要潜在靶点。但是广泛的、非选择性抑制HDACs导致了多种毒副反应,限制其临床的应用。因此,选择与肿瘤明显相关的HDAC及特异性抑制剂是目前亟待解决的问题。近年来,组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)成为血液学恶性肿瘤治疗的关键靶点。但是,mi RNA和HDAC3是否在肿瘤微环境促进DLBCL细胞生长和介导耐药中发挥作用,及HDAC3抑制剂是否可以抑制DLBCL细胞生长和克服耐药目前尚不清楚。因此,该研究深入探索mi RNA和HDAC3在肿瘤微环境促进DLBCL细胞生长和介导耐药作用及详尽机制。研究方法:本研究通过体外DLBCL细胞与MSC共培养体系和NOD/SCID动物模型的基础上通过mi RNA芯片分析锁定重点的差异mi RNA,并通过R-T PCR验证重点的差异mi RNA-26a,并通过转染调控mi RNA-26a的表达情况后,用CCK8和Annexin V-FITC/PI流式检测淋巴瘤细胞的生存情况;western blot验证HADC3蛋白表达的变化及可能活化的AKT和STAT3信号通路的关键蛋白;通过NOD/SCID动物模型体内验证HADC3抑制剂对抑制淋巴瘤细胞的生长和克服耐药的作用;最后,用HADC3抑制剂联合不同的小分子抑制剂,联合用药指标采用Calcu Syn软件计算不同靶向药物间的协同作用。综上,该研究通过一系列经典的实验技术,探讨mi RNA-26a/HDAC3在基质细胞促进DLBCL细胞生长和介导耐药的作用和机制研究。结果:1、mi RNA-26a在基质细胞促进DLBCL细胞生长中发挥关键作用1)mi RNA芯片分析结果显示,基质细胞共培养后,DLBCL细胞中mi RNA-15、mi RNA-16、mi RNA-26a等多个mi RNAs表达减低,且变化倍数≥2;2)RT-PCR验证与基质细胞共培养后,DLBCL细胞中mi RNA-26a明显下调;3)高表达mi RNA-26a克服基质细胞介导的耐药作用,说明mi RNA-26a在基质细胞介导DLBCL细胞耐药中发挥重要作用。2、HDAC3在基质细胞促进DLBCL细胞生长中发挥关键作用1)与基质细胞共培养后,DLBCL细胞的HDAC3蛋白表达水平升高;2)HDAC3抑制剂RGFP966抑制DLBCL细胞的增殖能力;3)HDAC3抑制剂RGFP966抑制AKT和STAT3信号通路的激活。3、mi RNA-26a/HDAC3在基质细胞介导DLBCL细胞耐药中的调控作用1)mi RNA-26a抑制DLBCL细胞中HDAC3蛋白的表达水平;2)高表达mi RNA-26a和HDAC3抑制剂RGFP966协同抑制DLBCL细胞的增殖,协同促进DLBCL细胞的凋亡。4、HDAC3抑制剂RGFP966克服基质细胞介导DLBCL细胞的耐药作用1)体内外实验结果表明与基质细胞共培养促进DLBCL细胞的增殖,基质细胞介导DLBCL细胞的耐药;2)体内外实验结果表明HDAC3抑制剂RGFP966抑制DLBCL细胞的增殖并克服基质细胞介导的DLBCL细胞耐药作用。5、HDAC3抑制剂RGFP966和EZH2抑制剂DZNep或BTK抑制剂依鲁替尼对DLBCL具有协同作用。结论:在DLBCL肿瘤微环境中,肿瘤基质细胞通过下调DLBCL细胞中的mi RNA-26a,进而负向调控HDAC3高表达,活化其下游AKT和STAT3信号通路,促进DLBCL细胞生长并介导耐药作用。为DLBCL的治疗提供新的治疗靶点。为这类严重影响人类健康的重大疾病的治疗提供新思路和临床应用的研究基础。