论文部分内容阅读
溴鼠灵、灭鼠酮等长效抗凝血类杀鼠剂(LAAR)自开发以来已广泛用于农业、林业和畜牧业。由于产品廉价易得,因而常有人类中毒、自杀或滥用等事件发生,常见的毒物接触途径包括口服和透皮吸收。通过抑制特定的还原酶,LAAR阻碍了维生素K的循环,使得肝脏凝血因子合成减少,引起出血。目前在治疗LAAR中毒时,临床上主要使用大剂量的维生素K1(VK1)注射液,疗效较为显著。然而,LAAR半衰期长达数月,即使在脱离危险期后,患者仍有长期给药作为维持治疗的需求。国外常用口服VK1片剂或混合胶束来增加可供选择的给药方式,以提高病人的顺应性和用药安全性,而目前口服VK1制剂在国内市场上仍旧难以获得。VK1是一种脂溶性维生素,也是临床上针对维生素K依赖性凝血因子缺乏症进行治疗的主体药物。通过在中毒患者体内补充VK1,促进凝血蛋白的有效合成,进而恢复人体凝血过程。除用于抗凝血类杀鼠剂的中毒解救,VK1还可用于预防和治疗新生儿出血,以及口服华法林等抗凝药或广谱抗生素所致的低凝血酶原血症等。考虑到VK1完全不溶于水的性质,只有在胆盐存在下才能在胃肠道中被吸收,本课题将先通过使用表面活性剂(卵磷脂和胆盐)对药物进行增溶,再将液体药物固体化,最终设计和制备基于固体自乳化技术的VK1片剂,在增加患者服药顺应性的同时提高药物溶出度。本文首先进行了VK1制剂处方前研究。VK1是一种透明的、黄色至橙色油状粘稠液体,无味或几乎无味,不溶于水,略溶于乙醇。建立了VK1体外分析方法,通过紫外分光光度法进行自乳化释药系统的溶出度测定,高效液相色谱法进行VK1含量和有关物质测定,主要针对分析方法的线性、精密度、专属性等进行考察,所建立的方法准确简便,满足测定要求。借鉴罗氏制药生产的VK1混合胶束(商品名Konakion?MM),本课题将VK1直接作为油相,多元醇作为助表面活性剂,并选用生物相容性好的大豆卵磷脂和甘氨胆酸作为复合表面活性剂,模拟体内胆盐的作用,制备了液体自纳米乳化释药系统(L-SNEDDS)。通过三相图绘制,比较成乳区域大小,筛选出最优助表面活性剂为Transcutol HP,并且确定了复合表面活性剂大豆卵磷脂-甘氨胆酸的配比为3:2。之后通过星点设计效应面法建立拟合模型,限定各响应值的最优范围,即粒径小于60 nm,Zeta电位在-25至-20范围内,20 min溶出度大于90%,绘制二维等高线重叠图。并根据制剂制备过程中的实际情况,确定了VK1的用量以及复合表面活性剂与Transcutol HP的用量比。最终,最优L-SNEDDS处方为四组分混合物,含有22.5%VK1(油),49.82%大豆卵磷脂和甘氨胆酸(3:2,表面活性剂),以及27.68%Transcutol HP(助表面活性剂)。VK1液体自纳米乳化释药系统外观为黄色澄清的黏稠液体。蒸馏水稀释后,能够形成均一稳定的纳米乳,透射电镜下乳滴粒径均一,平均为47.74 nm,电位为-20.53 mV。稀释过程中,温度升高、磁力搅拌转速加快,则自乳化速度越快,不同种介质(蒸馏水,0.1M HCl,pH6.8的磷酸盐缓冲液,0.5%SDS水溶液)对自乳化速度几乎没有影响。然而,稀释后的粒径则与介质种类有关,在0.1M HCl介质中乳滴粒径明显增大,而在其他三种介质中乳滴粒径相似。经考察,L-SNEDDS稳定性良好,并且稀释后6小时内,纳米乳中的药物在四种介质中均能够保持稳定不析出。为了最终将VK1液体自乳化系统制备成片剂,本文选择了六种载体材料作为待考察的固体吸附剂,分别为微晶纤维素(Vivapur?PH102)、乳糖(Cellatose?80)、无水磷酸氢钙(Fujicalin?)、硅酸镁铝(Neusilin?US2)、气相二氧化硅(Cab-O-Sil?M5P)和颗粒化气相二氧化硅(Aeroperl?300 Pharma)。首先通过扫描电镜比较不同种液固粉末的显微形态,结构决定性质。其次,通过原辅料相容性实验,排除了使主药迅速降解的Neusilin?US2。而Vivapur?PH102和Cellatose?80由于比表面积小,其最大吸附量和液固粉末的粉体学性质较差。在液固粉末溶出度实验中发现,两种气相二氧化硅阻碍L-SNEDDS溶出,故最终确定Fujicalin?为最优固体吸附剂,其能够在吸附大量液体时保持良好的流动性。将固体粉末与赋形剂混合,用直接压片法制备固体自乳化片剂。当吸附相同量的L-SNEDDS时,不溶性固体吸附剂用量较少时片剂更易被润湿,药物溶出度较大,类似的,减少助流剂微分硅胶的加入也更有利于自乳化进程。由于片剂中含有L-SNEDDS,遇水后变黏,故崩解剂的加入非常重要。与其他种类崩解剂相比,交联羧甲基纤维素钠使得崩解过程持续且温和,并随着其用量增加,药物溶出度提高。微晶纤维素与乳糖是固体自乳化片剂的填充剂,乳糖可溶于水的性质更有利于自乳化过程的进行,而微晶纤维素则是保证片剂硬度的重要因素。最终,固体自乳化片剂处方的最佳组成为:Fujicalin?/L-SNEDDS(1.4:1),20%MCC,37.6%乳糖,15%CMC-Na,0.2%微粉硅胶和0.5%硬脂酸镁。此外,固体自乳化片剂在四种溶出介质中的溶出速率和溶出度均显着高于常规片剂,在0.1M HCl和0.5%SDS中甚至达到100%,并且重建后粒径保持不变。总之,固体自乳化技术是提高水不溶性药物溶出度的有效方法,具有良好的前景。