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工业大麻作为一种重要的药用和纤维用植物,其化学成分复杂,用途广泛。国内外文献都报道大麻具有很高的药用价值。利用现代研究手段已经从大麻里分离得到大麻酚类、黄酮类、有机酸、萜类等化学成分,其中大麻二酚(CBD)作为活性成分具有抗菌、抗炎以及抗肿瘤等多种药用。本研究基于对大麻中CBD不同提取方法工艺的优化、抗氧化活性以及挖掘CBD合成相关基因为目的,优化提取和鉴定CBD的的方法,评价CBD抗氧化活性,并初步筛选可能合成CBD的差异表达基因。现将本论文工作总结如下:1.采用单因素优化法和响应面试验,从溶剂种类、超声时间、料液比、提取次数对CBD提取方法进行优化;设置大麻叶片在温度为65℃、75℃、85℃、95℃、105℃、115℃烘烤下研究CBDA的脱羧反应,结果表明:甲醇为提取溶剂、提取2次、超声10min、料液比1∶35(g/mL)为最佳提取条件;CBD在85℃、95℃时脱羧效果最好,脱羧转化率最高79.7%。建立超临界提取优化法,采用不同温度、压力下对两组不同处理下的大麻花叶下中CBD指提取量来考察最佳提取条件,结果显示:在不同的温度压力下对大麻素的提取效果有着明显的差异,其中在压力为400 bar,温度为45℃下,使用未通过热处理组的大麻在超临界二氧化碳提取CBD提取率达到最大。温度及压力过高或者过低都会导致提取率下降。两种提取方法都适用于CBD提取。2.对CBD进行抗氧化活性评价,从酶抑制实验、细胞损伤修复实验来考察CBD的抗氧化活性,结果显示:CBD对黄嘌呤氧化酶(XOD)、多酚氧化酶(PPO)、ABTS的IC50分别1.14?g/mL、4.99?g/mL和1.68?g/mL,CBD对XOD、PPO具有一定的抑制能力,高浓度的CBD对ABTS自由基也具有很强的清除能力,CBD对人食管癌细胞ECA109、人结肠癌细胞SW620、人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞MKN45、人正常肝细胞LO2、人胃粘膜细胞GES-1、人脐静脉内皮细胞HUVEC八种细胞均有较好的活性,毒性较小,说明CBD具有一定的药用价值。该研究结果为CBD的抗氧化物活性研究提供依据。3.对室内、室外培育的大麻叶片进行CBD含量测定,结果表明,室外培育条件下大麻叶片CBD含量高于室内条件下大麻叶片CBD含量。进一步对室内、室外培育条件下叶片组织进行转录组测序分析,对比差异基因(DEGs)的GO富集结果显示:在环境差异培育环境下,上调表达基因2246个,下调987个。根据KEGG代谢通路分析,DEGs均显著富集于苯丙酸生物合成、植物激素信号转导代谢途径。Heatmap显示:CBDAS、CYP86B1、ALDH2C4基因表达量增加,可能参与CBD合成。