构建特异性结合HBVX基因启动子的人工锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细胞中HBV的转录

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目的:构建人工锌指蛋白(zinc finger protein, ZFP)特异性结合于乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HBX)基因启动子,观察人工锌指蛋白在体外对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)复制和转录的抑制作用。方法:用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒pcDNA3.1-ZFP或pcDNA3.1-NC分别转染HepG2.2.15细胞分别作为实验组(ZFP组)和对照组(NC组)。1.用免疫印迹法(Western blot)检测实验组和对照组细胞中HBX蛋白的含量。2.用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测两组上清液中乙型肝炎核心相关抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)水平。3.用实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组上清液中HBV DNA含量。4.用RT-PCR检测实验组和对照组细胞内HBV mRNA水平。结果:重组质粒转染入HepG2.2.15细胞后;1.Western blot检测所得的HepG2.2.15细胞中HBX蛋白表达水平,相比对照组,实验组中HBX蛋白表达水平明显下降,差异具有统计学意义。2.相比对照组,ZFP组细胞培养上清液中HBeAg含量下降了33.8%(t=3.887,P=0.003)。3.ZFP组细胞培养上清液中HBV DNA拷贝量相对NC组下降了51.7%(t=23.079,P=0.000)。4.测得实验组细胞内HBV mRNA水平,与对照组相比,明显减少。结论:经过上述研究证明我团队前期人工设计的可特异性结合于HBX的ZFP可于HepG2.2.15细胞中有效抑制HBV转录及HepG2.2.15细胞中HBX的表达。
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