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目的:本研究利用7,12-二甲基苯蒽（DMBA）/巴豆油二阶段诱癌法建立DBA/2小鼠鳞状细胞癌荷瘤模型，注射不同药物后比较和分析不同实验组荷瘤小鼠的免疫应答情况，探讨OK-432肿瘤细胞疫苗抗肿瘤效应的影响。方法：1.常规培养KLN-205细胞，以glutaraldehyde（GA）作为交联剂，将KLN-205细胞与OK-432交联并剔除剩余物，制成OK-432肿瘤细胞疫苗，倒置显微镜下观察并待用。2.选择健康的七周龄DBA/2雌鼠（202g）75只，采用DMBA/巴豆油二阶段诱癌法建立DBA/2小鼠鳞状细胞癌荷瘤模型，观察其肿瘤发生发展情况。建模18周后，在成瘤小鼠中随机选取4只进行眼球采血并且全部处死，利用流式细胞仪检测外周血中CD4+T细胞、B细胞和CD4+CD25+Treg细胞的含量，取瘤体进行组织病理学观察。3.将荷瘤小鼠随机分为3组，每组16只，分别为OK-432疫苗组，OK-432组和空白对照组。各组小鼠于左侧腹腔分别注射浓度为5105个/100ul的OK-432肿瘤细胞疫苗100ul，0.7KE/100ul的OK-432100ul，PBS液100ul，每周注射1次，连续注射3周。4.于末次注射后第1、3、7、14天，每组随机选择4只DBA/2小鼠进行眼球采血，利用流式细胞仪检测外周血中CD4+T细胞、B细胞和CD4+CD25+Treg细胞的含量，并于末次注射后第14天取瘤体进行组织病理学观察。5.实验数据采用SPSS17.0统计分析软件进行处理分析，所得数据用x s表示。多组间样本均数比较采用单因素方差分析和LSD-t法进行统计，P<0.05认为差异具有统计学意义。结果：1. DBA/2小鼠鳞状细胞癌荷瘤模型的建立情况：采用DMBA/巴豆油二阶段诱癌法建立DBA/2小鼠鳞状细胞癌荷瘤模型，实验第8周后，小鼠陆续长出乳头状瘤，随后肿瘤的诱发率和小鼠荷瘤率逐渐增加。造模18周时，75只DBA/2小鼠中成瘤57只，成瘤率76%。2. OK-432肿瘤细胞疫苗对小鼠鳞状细胞癌的作用：末次注射后第14天取瘤体进行组织病理学观察，可见：OK-432肿瘤细胞疫苗组呈中度不典型增生，而空白对照组呈浸润癌。3. OK-432肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠外周血免疫细胞亚型的影响：药物末次干预后第1、3、7、14天，OK-432疫苗组和空白对照组相比CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞均明显增高，CD4+CD25+Treg细胞明显降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论：1.通过DMBA/巴豆油二阶段诱癌法可成功建立DBA/2小鼠鳞状细胞癌荷瘤模型，且该模型是一种较为理想的实验动物模型。2.组织病理学观察，提示OK-432肿瘤细胞疫苗可能对鳞状细胞癌具有较好的抗肿瘤效果。3.本实验中，OK-432疫苗组较空白对照组小鼠外周血中CD4+T细胞、B细胞含量明显升高，CD4+CD25+Treg细胞含量明显降低，说明OK-432肿瘤细胞疫苗能够增强鳞状细胞癌荷瘤小鼠的细胞免疫和体液免疫，抑制肿瘤的免疫逃避，提示OK-432肿瘤细胞疫苗对宿主抗肿瘤的免疫反应有一定的激活作用。