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本课题共分为以下两个部分：
第一部分，对138例胶质母细胞瘤进行临床资料总结和组织学观察，并行免疫组织化学染色检测IDH1、ATRX、P53、EGFR、PTEN、CD44和CHI3L1的表达，对其进行分子分型及预后相关性分析；对10例GBM IDH1-mut和15例E-GBM进行临床病理回顾性研究，随机选取15例nonE-GBM作为对照，进行组织病理学观察和EnVision法免疫组织化学染色，分子病理检测，对预后因素进行分析，旨在明确胶质母细胞瘤的临床病理特点和预后相关因素。
第二部分，探讨NTSR1促进胶质母细胞瘤生长的分子机制，首先在胶质母细胞瘤组织样本中检测NTSR1的表达，分析NTSR1表达与胶质母细胞瘤分子分型、重要分子标志IDH1、ATRX、P53表达的相关性及预后进行分析，发现NTSR1表达的患者较NTSR1阴性的患者预后差。在A172和U87细胞系中敲低NTSR1表达及过表达NTSR1，评估NTS/NTSR1对Wnt/β-Catenin信号的调控效应，并在动物模型中进行验证，进一步研究NTS/NTSR1对Wnt/β-Catenin信号的调节机制以及Wnt/β-catenin信号是否参与调节NTSR1表达，最后评估靶向NTSR1/Wnt/β-catenin环路的治疗潜能。
主要实验结果及结论如下:
第一部分结果
1.临床特点：
1.1胶质母细胞瘤（n=138）患者平均年龄61.4岁，中位年龄53岁，男性74例，女性64例，男：女之比1.16:1。幕上好发，幕下罕见，额叶、颞叶好发，约26.08%的患者累及2叶；以头昏头痛、呕吐等为主要症状，23.19%的患者复发，中位PFS6.0个月。中位OS9.0个月，平均OS15.6个月。
1.2E-GBM患者15例，占同一时期胶质母细胞瘤（n=498）的3.0%，男性12例，女性3例，平均年龄39.6岁，中位年龄34岁，14例累及幕上，以头昏、头痛为主要症状，1例有胶质瘤病史；nonE-GBM患者15例，以头昏、头痛为主要症状，1例有胶质瘤病史。二者中位年龄差异有统计学意义（p=0.002）。二者性别（p=1.000）、中位OS（p=0.079）差异无统计学意义。
1.3IDH1突变型GBM患者10例，占同一时期胶质母细胞瘤（n=165）的6.1%，男性6例，女性4例，平均年龄44.6岁，7例累及额叶，以头昏、头痛为主要症状，5例有胶质瘤病史。
2.组织病理学：GBM IDH1-mut和nonE-GBM的共同形态学特征为细胞多形性，异型明显，核分裂像易见，可见微血管增生及不同程度的栅栏状坏死和凝固性缺血性坏死。E-GBM形态表现为较为一致的上皮样细胞及横纹肌样细胞，异型明显，核分裂像易见，微血管增生，以地图样凝固性缺血性坏死为主。根据坏死累及范围分为大片和局灶。
3.免疫组化特点：
3.1138例GBM中IDH1阳性9例，EGFR弥漫表达46例，CHI3L1阳性66例，ATRX缺失27例，P53阳性52例。
3.210例GBM IDH1-mut中GFAP、Nestin、IDH1均呈阳性表达，Olig-2可见不同程度表达（9/10），P53呈弥漫阳性表达（9/10）；ATRX缺失。
4.分子特点：
4.1138例胶质母细胞瘤分子分型结果如下：间叶型66例，经典型46例，前神经元9例，其他/不能分类17例。
4.2一代测序法（Sanger测序法）显示10例GBM IDH1-mut均见IDH1R132H突变，15例E-GBM均未见IDH1R132H突变，15例nonE-GBM中见1例IDH1R132H突变；二者差异无统计学意义（p=1.000）。
4.3MS-PCR显示（9/10）GBM IDH1-mutMGMT启动子发生甲基化，46.7%（7/15）E-GBM MGMT启动子发生甲基化；53.3%（8/15）nonE-GBM MGMT启动子发生甲基化，二者差异无统计学意义（p=0.715）。
4.4实时荧光定量PCR示GBMI IDH1-mut（0/3）BRAFV600E无突变，E-GBM（46.7%，7/15）BRAFV600E突变，nonE-GBM（0/15）BRAFV600E无突变；二者在BRAF突变率(p=0.01)差异有统计学意义。
4.5FISH显示GBM IDH1-mut（0/3）1p/19q无缺失，15例E-GBM1p/19q无缺失，nonE-GBM（1/15）1p/19q缺失，二者差异无统计学意义（p=1.000）；15例E-GBM EGFR无扩增。
5.预后分析
5.1Kaplan-Meier曲线分析显示性别（p=0.823）、P53（p=0.093）与OS无显著统计学相关性，单因素Cox回归分析显示年龄（p=0.007）、IDH1突变状态（p=0.013）、ATRX突变状态（p=0.023）、分子分型（p=0.019）、治疗方式（p=0.000）与OS有显著统计学相关性，多因素Cox回归分析显示分子分型（p=0.008）、治疗方式（p=0.000）与OS有显著统计学相关性。
5.2E-GBM患者OS（≤12个月）的6例表现为广泛坏死（6/6），过表达EZH2（6/6），MGMT启动子未发生甲基化（5/6），BRAFV600E突变（3/6），治疗方式（仅手术，4/6）；E-GBM患者OS（>12个月）的3例E-GBM表现为局部坏死（3/3），EZH2低表达和阴性（3/3），MGMT启动子甲基化（2/3），BRAFV600E突变（0/3），治疗方式（手术+放疗/放化疗，2/3）。
5.3GBM IDH1-mut患者预后分析：4例预后差的患者均血管增生显著，平均密度19.9/20HPF，坏死范围广泛，4例患者其中3例累及两叶，治疗方式为仅手术或手术+化疗；5例预后好的患者肿瘤内血管增生不密集，平均密度10.1/20HPF，局灶坏死，其中4例均累及单叶，其中长期存活的3例的治疗方式为手术+放化疗。
第一部分结论:
1.胶质母细胞瘤患者OS与胶质母细胞瘤分子分型、重要分子标志IDH1、ATRX的突变状态、治疗方式相关，分子亚型、治疗方式是胶质母细胞瘤的独立预后因素。
2.E-GBM少见，预后差。广泛坏死，MGMT启动子未甲基化，EZH2过表达和缺乏辅助放化疗均提示E-GBM预后不良。
3.GBM IDH1-mut少见，肿瘤累及范围、坏死范围和微血管增生密度、治疗方式均是GBM IDH1-mut患者的预后因素。
第二部分结果
1.138例GBM中NTSR1阳性80例，NTSR1在GBM分子亚型中表达差异有显著统计学意义（p=0.003），在经典型、间叶型的阳性率分别是67.4%、63.6%，前神经元型和不能确定亚型分别是11.1%和35.3%。NTSR1与IDH1表达呈显著统计学负相关（p=0.001），NTSR1与ATRX表达呈显著统计学正相关（p=0.043）；NTSR1与P53表达无显著统计学相关（P=0.263）；Kaplan-Meier曲线分析显示NTSR1表达与中位OS统计学负相关（p=0.008），单因素Cox分析显示NTSR1表达较NTSR1阴性预后差。
2.降低NTSR1表达和使用NTSR1的药物性抑制剂SR48692处理A172和U87细胞系，Wnt/β-Catenin信号活性显著降低和Wnt/β-Catenin信号下游靶位（MYC、CCND1和MMP7）的mRNA表达降低，NF-κB和MAPK磷酸化水平显著降低；在NF-κB抑制剂（TPCA-1）和MAPK抑制剂（U0126）作用下，Wnts表达水平降低；U251细胞过表达NTSR1，Wnt/β-Catenin信号活性显著增加和Wnt/β-Catenin下游靶位表达水平增加；使用Wnt有效的活化剂（Wnt3a）刺激，NTSR1mRNA和NTSR1蛋白水平增加，在Wnt抑制剂iCRT3作用下，NTSR1mRNA和NTSR1蛋白水平降低（p<0.05）。
3.体外实验使用NTS或Wnt3a能显著上调A172和U87细胞增殖率和降低凋亡，使用SR48692或iCRT3联合处理细胞，使NTS和Wnt3a的增殖效应减弱和凋亡增加（p<0.01）。
4.NOD-SCID BALB/c小鼠皮下移植瘤实验示SR48692或iCRT3处理组，肿瘤生长率受到显著抑制。SR48692和iCRT3肿瘤抑制生长，伴随增殖标记Ki67指数的降低（p<0.05）。
第二部分结论
1.NTSR1表达与胶质母细胞瘤分子亚型有关。NTSR1表达是胶质母细胞瘤预后差的因素。
2.在胶质母细胞瘤中NTS/NTSR1通过上调NF-κB和MAPK信号的表达，增加Wnt/β-Catenin信号通路活性；NTSR1受Wnt/β-catenin信号调节，NTS/NTSR1和Wnt/β-catenin信号之间存在正反馈环路；靶向抑制NTSR1/Wnt/β-catenin环路，胶质母细胞瘤细胞生长受到明显抑制。
第一部分，对138例胶质母细胞瘤进行临床资料总结和组织学观察，并行免疫组织化学染色检测IDH1、ATRX、P53、EGFR、PTEN、CD44和CHI3L1的表达，对其进行分子分型及预后相关性分析；对10例GBM IDH1-mut和15例E-GBM进行临床病理回顾性研究，随机选取15例nonE-GBM作为对照，进行组织病理学观察和EnVision法免疫组织化学染色，分子病理检测，对预后因素进行分析，旨在明确胶质母细胞瘤的临床病理特点和预后相关因素。
第二部分，探讨NTSR1促进胶质母细胞瘤生长的分子机制，首先在胶质母细胞瘤组织样本中检测NTSR1的表达，分析NTSR1表达与胶质母细胞瘤分子分型、重要分子标志IDH1、ATRX、P53表达的相关性及预后进行分析，发现NTSR1表达的患者较NTSR1阴性的患者预后差。在A172和U87细胞系中敲低NTSR1表达及过表达NTSR1，评估NTS/NTSR1对Wnt/β-Catenin信号的调控效应，并在动物模型中进行验证，进一步研究NTS/NTSR1对Wnt/β-Catenin信号的调节机制以及Wnt/β-catenin信号是否参与调节NTSR1表达，最后评估靶向NTSR1/Wnt/β-catenin环路的治疗潜能。
主要实验结果及结论如下:
第一部分结果
1.临床特点：
1.1胶质母细胞瘤（n=138）患者平均年龄61.4岁，中位年龄53岁，男性74例，女性64例，男：女之比1.16:1。幕上好发，幕下罕见，额叶、颞叶好发，约26.08%的患者累及2叶；以头昏头痛、呕吐等为主要症状，23.19%的患者复发，中位PFS6.0个月。中位OS9.0个月，平均OS15.6个月。
1.2E-GBM患者15例，占同一时期胶质母细胞瘤（n=498）的3.0%，男性12例，女性3例，平均年龄39.6岁，中位年龄34岁，14例累及幕上，以头昏、头痛为主要症状，1例有胶质瘤病史；nonE-GBM患者15例，以头昏、头痛为主要症状，1例有胶质瘤病史。二者中位年龄差异有统计学意义（p=0.002）。二者性别（p=1.000）、中位OS（p=0.079）差异无统计学意义。
1.3IDH1突变型GBM患者10例，占同一时期胶质母细胞瘤（n=165）的6.1%，男性6例，女性4例，平均年龄44.6岁，7例累及额叶，以头昏、头痛为主要症状，5例有胶质瘤病史。
2.组织病理学：GBM IDH1-mut和nonE-GBM的共同形态学特征为细胞多形性，异型明显，核分裂像易见，可见微血管增生及不同程度的栅栏状坏死和凝固性缺血性坏死。E-GBM形态表现为较为一致的上皮样细胞及横纹肌样细胞，异型明显，核分裂像易见，微血管增生，以地图样凝固性缺血性坏死为主。根据坏死累及范围分为大片和局灶。
3.免疫组化特点：
3.1138例GBM中IDH1阳性9例，EGFR弥漫表达46例，CHI3L1阳性66例，ATRX缺失27例，P53阳性52例。
3.210例GBM IDH1-mut中GFAP、Nestin、IDH1均呈阳性表达，Olig-2可见不同程度表达（9/10），P53呈弥漫阳性表达（9/10）；ATRX缺失。
4.分子特点：
4.1138例胶质母细胞瘤分子分型结果如下：间叶型66例，经典型46例，前神经元9例，其他/不能分类17例。
4.2一代测序法（Sanger测序法）显示10例GBM IDH1-mut均见IDH1R132H突变，15例E-GBM均未见IDH1R132H突变，15例nonE-GBM中见1例IDH1R132H突变；二者差异无统计学意义（p=1.000）。
4.3MS-PCR显示（9/10）GBM IDH1-mutMGMT启动子发生甲基化，46.7%（7/15）E-GBM MGMT启动子发生甲基化；53.3%（8/15）nonE-GBM MGMT启动子发生甲基化，二者差异无统计学意义（p=0.715）。
4.4实时荧光定量PCR示GBMI IDH1-mut（0/3）BRAFV600E无突变，E-GBM（46.7%，7/15）BRAFV600E突变，nonE-GBM（0/15）BRAFV600E无突变；二者在BRAF突变率(p=0.01)差异有统计学意义。
4.5FISH显示GBM IDH1-mut（0/3）1p/19q无缺失，15例E-GBM1p/19q无缺失，nonE-GBM（1/15）1p/19q缺失，二者差异无统计学意义（p=1.000）；15例E-GBM EGFR无扩增。
5.预后分析
5.1Kaplan-Meier曲线分析显示性别（p=0.823）、P53（p=0.093）与OS无显著统计学相关性，单因素Cox回归分析显示年龄（p=0.007）、IDH1突变状态（p=0.013）、ATRX突变状态（p=0.023）、分子分型（p=0.019）、治疗方式（p=0.000）与OS有显著统计学相关性，多因素Cox回归分析显示分子分型（p=0.008）、治疗方式（p=0.000）与OS有显著统计学相关性。
5.2E-GBM患者OS（≤12个月）的6例表现为广泛坏死（6/6），过表达EZH2（6/6），MGMT启动子未发生甲基化（5/6），BRAFV600E突变（3/6），治疗方式（仅手术，4/6）；E-GBM患者OS（>12个月）的3例E-GBM表现为局部坏死（3/3），EZH2低表达和阴性（3/3），MGMT启动子甲基化（2/3），BRAFV600E突变（0/3），治疗方式（手术+放疗/放化疗，2/3）。
5.3GBM IDH1-mut患者预后分析：4例预后差的患者均血管增生显著，平均密度19.9/20HPF，坏死范围广泛，4例患者其中3例累及两叶，治疗方式为仅手术或手术+化疗；5例预后好的患者肿瘤内血管增生不密集，平均密度10.1/20HPF，局灶坏死，其中4例均累及单叶，其中长期存活的3例的治疗方式为手术+放化疗。
第一部分结论:
1.胶质母细胞瘤患者OS与胶质母细胞瘤分子分型、重要分子标志IDH1、ATRX的突变状态、治疗方式相关，分子亚型、治疗方式是胶质母细胞瘤的独立预后因素。
2.E-GBM少见，预后差。广泛坏死，MGMT启动子未甲基化，EZH2过表达和缺乏辅助放化疗均提示E-GBM预后不良。
3.GBM IDH1-mut少见，肿瘤累及范围、坏死范围和微血管增生密度、治疗方式均是GBM IDH1-mut患者的预后因素。
第二部分结果
1.138例GBM中NTSR1阳性80例，NTSR1在GBM分子亚型中表达差异有显著统计学意义（p=0.003），在经典型、间叶型的阳性率分别是67.4%、63.6%，前神经元型和不能确定亚型分别是11.1%和35.3%。NTSR1与IDH1表达呈显著统计学负相关（p=0.001），NTSR1与ATRX表达呈显著统计学正相关（p=0.043）；NTSR1与P53表达无显著统计学相关（P=0.263）；Kaplan-Meier曲线分析显示NTSR1表达与中位OS统计学负相关（p=0.008），单因素Cox分析显示NTSR1表达较NTSR1阴性预后差。
2.降低NTSR1表达和使用NTSR1的药物性抑制剂SR48692处理A172和U87细胞系，Wnt/β-Catenin信号活性显著降低和Wnt/β-Catenin信号下游靶位（MYC、CCND1和MMP7）的mRNA表达降低，NF-κB和MAPK磷酸化水平显著降低；在NF-κB抑制剂（TPCA-1）和MAPK抑制剂（U0126）作用下，Wnts表达水平降低；U251细胞过表达NTSR1，Wnt/β-Catenin信号活性显著增加和Wnt/β-Catenin下游靶位表达水平增加；使用Wnt有效的活化剂（Wnt3a）刺激，NTSR1mRNA和NTSR1蛋白水平增加，在Wnt抑制剂iCRT3作用下，NTSR1mRNA和NTSR1蛋白水平降低（p<0.05）。
3.体外实验使用NTS或Wnt3a能显著上调A172和U87细胞增殖率和降低凋亡，使用SR48692或iCRT3联合处理细胞，使NTS和Wnt3a的增殖效应减弱和凋亡增加（p<0.01）。
4.NOD-SCID BALB/c小鼠皮下移植瘤实验示SR48692或iCRT3处理组，肿瘤生长率受到显著抑制。SR48692和iCRT3肿瘤抑制生长，伴随增殖标记Ki67指数的降低（p<0.05）。
第二部分结论
1.NTSR1表达与胶质母细胞瘤分子亚型有关。NTSR1表达是胶质母细胞瘤预后差的因素。
2.在胶质母细胞瘤中NTS/NTSR1通过上调NF-κB和MAPK信号的表达，增加Wnt/β-Catenin信号通路活性；NTSR1受Wnt/β-catenin信号调节，NTS/NTSR1和Wnt/β-catenin信号之间存在正反馈环路；靶向抑制NTSR1/Wnt/β-catenin环路，胶质母细胞瘤细胞生长受到明显抑制。