片形吸虫病(Fasciolasis)是由片形属的肝片吸虫(Fasciola hepitica)和大片吸虫(Fasciola gigantica)寄生于牛、羊等多种动物的胆管和肝脏中引起的一种寄生虫病。该病在我国分布广泛,给畜牧业带来巨大的经济损失。同时片形吸虫的囊蚴也可感染人,严重危害人们的健康,是一种重要的人兽共患寄生虫病。本研究利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了大片吸虫成虫cDNA文库,文库库容量为2.08×106 pfu/mL,重组率为98%。扩增后的文库滴度为6.23×109 pfu/mL,插入片段平均大小约为1000 bp。采用PCR从已构建的DNA文库中克隆了组织蛋白酶L1(Fasciola gigantica Cathepsin L1,FgCL1)编码序列,提交GenBank,登录号为EF536899。FgCL1编码序列亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,重组质粒pGEX/FgCL1在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导以包涵体形式表达,其分子量为61KD左右,利用High-Affinity GST Resin亲和层析法进行目的蛋白的纯化,纯度为77.8%。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以识别自然感染大片吸虫的牛血清。用纯化的FgCL1作为包被抗原,建立了一种检测片形吸虫病的ELISA诊断方法,并对ELISA反应条件进行了优化。确定抗原的最适包被浓度为4ug/ml;血清的稀释度为1:200,37℃作用0.5h;最佳封闭条件为5%脱脂奶粉,37℃封闭3h;酶标二抗的最佳稀释度是1:16 000,37℃作用0.5h;底物显色时间为20min。根据已经建立的ELISA方法及反应条件,确定阴阳性临界值为0.143。重组抗原与血吸虫、华支睾吸虫、弓形虫无交叉性感染,但与东毕吸虫有轻微交叉反应,说明建立的ELISA方法特异性较好。为我国片形吸虫病的免疫诊断和血清学调查提供了行之有效的技术手段。