棉花再生体系建立及CarNAC5基因的遗传转化

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanghai19881016
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棉花作为世界性重要的经济作物,其遗传改良工作一直被受世人关注。然而,棉花再生体系的建立是制约棉花转基因技术能否成功的关键。棉花通过体细胞胚胎发生和植株再生比较困难,使得新疆棉花转基因育种研究的发展只能依赖转化效率及遗传稳定性均不够理想的花粉管通道法。因此建立一个高效、优良的棉花再生体系是促进转基因技术在棉花育种中广泛应用的先决条件。与其它作物相比,棉花组织培养依然比较困难,主要表现在基因型的依赖性强﹑从愈伤组织高效率地转化为胚性愈伤组织过程复杂、周期长﹑胚发生率很低、再生品种少、畸形苗多、生根困难,基因转化率低和转基因棉花农艺性状的变异等限制因子。针对上述存在的诸多问题,本研究以四种新疆棉花栽培品种(新海25、新海16、新陆早39号和新陆早42号)为试验材料,对其体细胞胚胎发生和植株再生体系进行了研究,建立了相应的体细胞再生体系,并以陆地棉品种中棉所44号胚性愈伤组织为受体,通过农杆菌介导法进行NAC转录因子的遗传转化并获得了转化再生植株。为今后新疆海岛棉抗旱分子育种奠定了基础。本研究主要结果如下:1.以海岛棉和陆地棉无菌苗下胚轴为外植体,通过愈伤组织诱导时期激素的配比,筛选海岛棉和陆地棉愈伤诱导最适宜培养基,研究结果表明:陆地棉愈伤诱导最适培养基为MSB添加0.1mg/LKT及0.05mg/L2,4-D,愈伤组织诱导率达90%以上;海岛棉愈伤组织诱导阶段的最佳条件为MSB添加0.1mg/L KT及0.1mg/L2,4-D,愈伤组织诱导率达100%。2.棉花胚性愈伤组织增殖培养基为MSB中添加1.9g/L KN03并添加1.8g/L gelrite、0.1g/L天冬酰胺、0.1g/L谷氨酰胺;体细胞胚形成的最适条件为MSB中KNO3加倍﹑去除NH4NO3并添加2.0g/L凝固剂gelrite、0.1g/L天门冬酰胺、0.1g/L谷氨酰胺及铺滤纸。成苗培养基凝固剂为gelrite优于琼脂粉。3.以中棉所44号胚性愈伤为外植体,通过农杆菌介导的转基因技术,获得转NAC转录子家族的转化体系,并获得了转化再生植株。经卡那霉素筛选获得抗生小植株,通过PCR检测,初步证明NAC转录因子家族基因中的CarNAC5基因已转化到再生的棉花植株中;经过PEG胁迫条件下的GUS组织化学染色证实了rd29A启动子在转基因棉花中能够诱导GUS基因的表达。
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