论文部分内容阅读
目的：本研究将不同化学基团(-CH3、-NH2、-OH、-COOH、-SH)接枝于基片上,构成带有不同单一化学基团的自组装单分子膜(SAMs),构建含有不同化学基团的细胞微环境,研究微环境中不同化学基团对卵巢癌细胞生长特征及细胞转移的影响,阐明微环境中化学基团在卵巢癌发生和发展中的作用及机制,为卵巢癌的治疗探索一条新途径。方法：1.体外培养人卵巢癌细胞Skov-3,与携带不同的化学基团(-OH、-COOH、-NH2、-SH、-CH3)的自组装单分子膜(self-assembled monolayers, SAMs)共培养。2.通过接触角实验反应不同化学基团的亲疏水性。3.扫描电镜(Scanning Electron Microscope, SEM)观察与携带不同的化学基团共培养的卵巢癌SKOV-3细胞形态。4. DAPI染色法观察与携带不同的化学基团共培养的卵巢癌SKOV-3细胞在60min的早期粘附情况。5.细胞骨架染色观察与携带不同的化学基团共培养的卵巢癌SKOV-3细胞肌动蛋白粘着斑的变化。6.SKOV-3细胞与携带不同的化学基团共培养5天,MTT法检测其细胞增殖率。7.检测不同化学基团的细胞毒性：Calcein/PI染色观察与携带不同的化学基团共培养的卵巢癌SKOV-3的死活细胞数目；LDH检测细胞培养上清中LDH的酶活性,来检测细胞毒性8.流式细胞仪检测与携带不同的化学基团共培养的卵巢癌SKOV-3细胞凋亡。9.流式细胞仪检测与携带不同的化学基团共培养的卵巢癌SKOV-3细胞周期。10. Transwell小室检测与携带不同的化学基团共培养的卵巢癌SKOV-3细胞迁移能力。11.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测与细胞转移相关的基因E-cadherin和β-catenin的表达。成果：1.接触角实验表明-OH为极亲水性基团,-COOH和-NH2为亲水性基团,-CH3为极疏水性基团。2.扫描电镜显示在-CH3表面Skov-3细胞铺展状态差,呈球形；相对于其他基团,-NH2表面细胞呈多边形,铺展面积大,细胞核增大,细胞间相互连接。3.-COOH、-NH2基团表面的SKOV-3的DAPI细胞染色数目均明显多于对照组(P<0.05)。4.细胞骨架染色显示-CH3干预后的Skov-3细胞形态及边界不清,膜周染色变淡,细胞核区模糊；而-COOH和-NH：表面上的细胞呈多边形。5.MTT实验结果表明-CH3表面卵巢癌SKOV-3细胞增殖明显受到抑制(P<0.01),NH2可促进细胞增殖。6. Calcein/PI染色及LDH实验结果提示：-SH、-CH3对卵巢癌Skov-3具有细胞毒性；7.-CH3有促进Skov-3细胞凋亡及死亡的作用(P<0.05)。8.与-OH和-CH3共培养的SKOV-3细胞在有丝分裂相(G2/M)的百分比分别是明显少于对照组(P<0.01)。9.与-CH3共培养的Skov-3细迁移数明显低于对照组(P<0.01)。10.实时荧光定量PCR结果显示：-CH。明显增加E-cadherin、β-catenin基因表达,而在-NH2组E-cadherin、β-catenin基因表达均明显下调。结论：1.不同化学基团可影响卵巢癌Skov-3细胞形态和细胞粘附：亲水性基团-NH2表面,卵巢癌Skov-3细胞生长状态佳,细胞粘附数量多；-CH3、-SH、-OH表面细胞形态差,对细胞粘附无明显影响。2.不同化学基团可影响卵巢癌Skov-3细胞的增殖、细胞毒性、细胞周期及凋亡：疏水性基团-CH。可抑制肌动蛋白的形成,抑制细胞的有丝分裂,使卵巢癌Skov-3细胞增殖能力明显下降,且具有细胞毒性,促进细胞凋亡及死亡；-NH2、-COOH不具有细胞毒性；-NH2促进细胞增殖。3.不同化学基团可影响卵巢癌Skov-3细胞的迁移：-OH、-CH3抑制卵巢癌Skov-3细胞的迁移能力,-NH2促进细胞迁移。4.不同化学基团通过EMT过程影响卵巢癌Skov-3细胞生物学行为：-NH2使E-cadherin、β-catenin基因表达明显下调,促进Skov-3的发生发展。而-CH3组E-cadherin、β-catenin基因的表达明显上调,CH3可能通过影响上皮间质转化而抑制卵巢癌细胞的发生、发展、侵袭及转移。本实验研究提示了-CH3不利于卵巢癌Skov-3细胞的生长,具有抑制其生、发展及转移的作用,-CH。对于探索设计新的卵巢癌治疗方案具有潜在作用,可能为卵巢癌的治疗探索一条新途径。