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帕金森疾病(Parkinson’s disease, PD)是一种老年期常见的慢性、进行性神经退行性疾病(neurodegenerative disease, ND),发病机制十分复杂,其确切病因尚不明确。microRNA (miRNA)是一类内源小分子非编码RNA,主要在转录后水平参与基因调控,在各种生命活动中起重要作用,因此,可能在帕金森疾病的发生、发展过程中起着重要作用。分析鉴定调控帕金森病相关基因的miRNA,对于深入理解miRNA的生物学功能、揭示更深层次的miRNA作用机制具有重要意义。本研究以帕金森疾病相关的snca、1rrk2、park2、pitx3和uchl1基因的mRNA为靶分子,利用miRanda、miRDB、MicroCosm Targets、Pictar、TargetScan等五种miRNA靶位点分析软件,预测可能靶向这些mRNA的miRNAs,再通过双荧光素酶报告基因法(Dual-luciferase assays system)对软件预测结果进行实验验证,结果如下：1、利用五种miRNA靶位点分析软件搜索可能调控这些转录物的miRNA:miRanda预测到98个(?)niRNA, miRDB预测到46个,MicroCosm Targets预测到191个,Pictar预测到2个,TargetScan预测到97个。至少用两种软件同时检测到的miRNA:mRNA匹配区共98个,可能调控lrrk2的15个,可能调控park2的38个,可能调控pitx3的7个,可能调控pinkl的13个,可能调控snca的10个,可能调控uchl1的15个。2、克隆小鼠snca、Irrk2、park2、pitx3、uchll等5个与帕金森疾病密切相关基因mRNA的3’UTR区,构建psiCHECK2—靶基因3’UTR重组质粒。克隆26个相应的miRNA,构建了含有U6启动子、具有完整茎环结构miRNA前体的pMD 19 T-miRNA质粒。3、共表达候选miRNA与携带候选靶基因3’UTR序列的双荧光素酶报告基因发现,miR-153、miR-350、miR-141显著下调携带有snca-3’UTR区的Rluc表达；miR-27a/b、miR-29a、miR-466k显著下调携带有park2-3’UTR区的Rluc表达；miR-183、miR-133a/b、miR-30b、miR-211下调携带有pitx3-3’UTR区的Rluc表达；miR-92a、miR-466g、miR-9、miR-20a、miR-17下调uchll-3’UTR区的Rluc表达；miR-30a、miR-30b、miR-9、miR-30e、miR-384-5p、miR-467b下调Irrk2-3’UTR区的Rluc表达。结果提示,miRNA确实参与帕金森致病调控。本研究为进一步探讨miRNA在帕金森疾病中的调控机制,阐明帕金森疾病的遗传调控网络提供了实验依据,并为寻找治疗帕金森疾病的新药物靶点,以及开发治疗帕金森疾病的新药物和方法提供了思路。