炎症性疾病已经成为影响全球人类健康的重要威胁之一,包括心血管疾病、神经系统疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤等慢性非传染性重大疾病都属于炎症性疾病的范畴。因此,深入探究炎症反应的发生发展过程,可以为这些炎症性疾病的预防、诊断和治疗提供新的策略。研究发现外泌体可以通过运输特异性货物来参与炎症反应。而炎症小体是负责感知机体潜在威胁并引发炎症反应的多蛋白复合体。那么,炎症小体激活后产生的外泌体的蛋白质组、功能和影响疾病的发生发展的机制仍不十分清楚。本研究探讨了NLRP1b（NLR family pyrin domain containing 1b）炎症小体激活产生的外泌体的蛋白质组和功能。首先,我们利用差速超速离心（Differential ultracentrifugation,DUC）法分离提取Con（阴性对照）、LPS（Lipopolysaccharide）和Vb P（Val-boro Pro）刺激NLRP1b炎症小体产生的外泌体,并对这三者用TEM（Transmission electron microscope）、NTA（Nanoparticle tracking analysis）和Westren blot对外泌体的外观形态、粒径大小和外泌体标志物进行比较评估,发现我们分离提取的外泌体样品形态呈现茶托样双层膜结构、外泌体平均直径约30-200 nm、纯度较好无其它非外泌体组分污染。在RAW264.7巨噬细胞中,我们发现Vb P处理组中显著上调的蛋白可能在细胞间通讯中行使特殊的细胞学功能。为了特异性富集特定种类的外泌体,排除其它外泌颗粒物的干扰,我们利用DUC法结合APEX（Engineered ascorbate peroxidase）邻近标记技术富集外泌体蛋白,发现此方法富集到Vb P/Con显著上调的外泌体蛋白数量是常规方法的1.5倍。通过GO（Gene ontology）和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）信号通路功能富集分析发现,在Vb P刺激巨噬细胞NLRP1b炎症小体激活后,利用APEX邻近标记技术标记产生的外泌体蛋白富集了与免疫反应和肿瘤相关的蛋白。最后,为了深入研究NLRP1b炎症小体激活后产生的外泌体的细胞学功能,肝癌细胞的细胞增殖实验显示,Vb P刺激NLRP1b炎症小体产生的外泌体可以显著促进肝癌细胞Hep G2的增殖。本研究通过质谱鉴定了NLRP1b炎症小体激活后产生的外泌体蛋白质组,并发展了邻近标记技术富集外泌体蛋白质组的新方法,提高了外泌体蛋白质组鉴定的覆盖度和特异性。NLRP1b炎症小体激活后外泌体蛋白质组中,富集了免疫/炎症反应、肿瘤调控相关的蛋白,为进一步揭示炎症小体相关外泌体的细胞学功能奠定了基础。