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β-酪蛋白是一种高效表达的乳蛋白，在牛乳中其含量是9.3g/L，占牛乳蛋白总量的28.2％，仅次于αs-1酪蛋白，且其启动子的组织特异性较好，表达稳定，不会造成异位表达。为了建立牛乳腺特异表达载体，根据已发表的CSN25′和3′调控区序列设计两对引物并引入酶切位点，用高保真PCR扩增了牛CSN2基因的5′端和3′端的调控元件及启动子，长度分别约为1.8kb和1.1kb，并将CSN25′和3′调控区序列分别克隆到pMD19-TVector上，将插入目的片段重组质粒送上海基康生物技术有限公司进行测序，测序结果Blast程序与已发表的序列的相应区域进行比对，结果表明PCR扩增的CSN25′端和3′端调控区与已发表的序列的同源性为97％、99％。 为了建立牛乳腺暂态生物反应器，我们将已经克隆的CSN2基因5′端和3′端调控序列，运用体外DNA重组技术分别连接到改造过的pcDNA3.0真核表达载体上。经鉴定将正确的目的克隆命名为pC，然后将目的基因hLYZ插入pC载体的CSN2基因5′侧翼区下游和3′侧翼区上游。为确定建立的载体是否表达，将pC-hLYZ质粒及阳性对照hLYZ质粒分别经PEI包裹以外科手术方法，经乳腺导管注入哺乳期家兔乳腺内，转染72h后，采集乳汁并检测人溶菌酶基因的表达情况，经平板抑菌实验检测结果表明pC-hLYZ质粒可以驱动hLYZ基因的表达。从而确定成功建立了牛乳腺特异表达人溶菌酶基因的载体。该载体的建立为牛乳腺高效表达技术体系深入研究奠定了基础。