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第一章大鼠小肠移植模型的建立目的建立稳定而可靠的大鼠异位节段性小肠移植模型。方法近交系F344大鼠为供体,封闭群SD大鼠为受体。取带血管的10cm左右小肠段作为供肠,带部分腹主动脉的肠系膜上动脉与受体肾下腹主动脉行端-侧吻合,供体门静脉与受体肾下下腔静脉行端-侧吻合。供肠近端结扎后固定于腹壁,远端肠管右下腹壁造瘘。结果共进行了52次正式实验,43例手术成功,成功率82.7%。供体平均手术时间(42.1±8.7)min,受体平均手术时间为(67.6±11.5)min,其中动脉吻合(10.5±3.7)min,静脉吻合(12.7±3.6) min。移植小肠冷缺血时间(21.9±7.6) min,热缺血时间(23.9±3.1) min。受体大鼠生存时间最短4.5d,最长10 d,平均(5.9±1.9)d。结论采用本方法建立的大鼠小肠移植模型稳定、可靠、成功率高。第二章不成熟树突状细胞(iDC)的培养、扩增与鉴定目的探讨体外诱导和扩增大鼠iDC的方法,并从形态学、表型和免疫学功能等方面予以鉴定。方法无菌条件下获取大鼠骨髓前体细胞,在GM-CSF(5ng/ml)条件下进行体外诱导、扩增。隔日半量换液,第6天收获细胞。显微镜下观察形态学变化,流式细胞仪检测细胞表面分子表达情况,混合淋巴细胞反应进行功能学检测。结果培养至第6天可获得iDC。电镜下可见细小树突状突起,流式细胞仪测定表明iDC低表达MHCII、CD80和CD86;iDC刺激T淋巴细胞增殖的能力显著低于成熟DC(mDC)。结论本法是体外诱导扩增大鼠骨髓来源iDC的有效方法。第三章MyD88-siRNA诱导iDC MyD88基因沉默目的应用RNA干扰(RNAi)方法诱导iDC MyD88基因沉默。方法以阳离子脂质体作为载体,将化学合成的小干扰RNA(siRNA)体外转染iDC。转染后检测转染效率、细胞活力、细胞表面分子表达,RT-PCR和Western blot法测定MyD88表达水平。结果在siRNA转染浓度为1μg/500μl条件下,转染效率为(85.6±3.5)%,转染iDC低表达MHC II、CD80和CD86;转染iDC MyD88基因mRNA转录及MyD88蛋白表达水平显著降低。结论化学合成siRNA在阳离子脂质体介导下可以高效地进入iDC并能够有效诱导特异基因沉默,同时转染过程并不诱导iDC成熟。第四章MyD88基因沉默的iDC延长小肠移植受体的生存时间目的探讨静脉输注MyD88基因沉默的iDC能否延长大鼠小肠移植受体的存活时间。方法供体为F344大鼠,受体为SD大鼠,供受体间进行异位节段性小肠移植。根据受体接受处理因素的不同分4组,A组:移植前1周注射1ml生理盐水;B组:移植前1周注射含2×106个未转染iDC混悬液1ml;C组:移植前1周注射含2×106个阴性对照siRNA转染iDC混悬液1ml;D组:移植前1周注射含2×106个MyD88-siRNA转染iDC的混悬液1ml。移植后观察受体的存活时间,并在适当时间取移植小肠作病理检查。结果A、B、C和D组受体平均存活时间分别为(5.9±1.9)天、(11.0±1.87)天,(10.2±1.64)天和(18.6±3.60)天。B、C两组比较差异无统计学意义(P>0.05),但显著长于A组(P<0.05); D组显著高于前三组(P<0.05)。病理示:A(移植后第6天)、B(移植后第10天)、C(移植后第10天)三组病理所见基本相似,皆为急性重度排斥反应的表现;D组移植后第10天标本为轻度排斥反应的表现,第19天标本呈急性重度排斥反应的表现。结论MyD88基因沉默的iDC可抑制大鼠小肠移植后的排斥反应,延长受体以及移植小肠的存活时间。第五章MyD88基因沉默对iDC免疫功能的影响目的研究MyD88-siRNA干扰对大鼠iDC免疫功能的影响,进而探讨MyD88基因沉默的iDC诱导移植免疫耐受的可能机制。方法体外培养大鼠骨髓来源iDC,进行MyD88-siRNA干扰获得MyD88基因沉默的iDC。采用ELISA法测定脂多糖(LPS)刺激下MyD88基因沉默的iDC分泌细胞因子的变化。取移植后一周受体大鼠脾脏,制备脾脏T淋巴细胞悬液,ELISA法测定T淋巴细胞分泌细胞因子的变化。采用混合淋巴细胞反应的方法检测MyD88基因沉默的iDC、未转染iDC和阴性转染iDC刺激T细胞增殖反应的能力。经静脉注射MyD88基因沉默的iDC并检测其在淋巴器官的分布情况。结果在LPS刺激下MyD88基因沉默的iDC产生促炎细胞因子IL-12和TNF-α的能力显著降低。接受MyD88基因沉默的iDC处理的受体大鼠脾脏T细胞分泌Th1型细胞因子能力显著降低,而分泌Th2型细胞因子能力显著增强。在体外,MyD88基因沉默的iDC刺激T细胞增殖的能力与未转染iDC、阴性对照siRNA转染的iDC无显著差异。在体内,MyD88-siRNA转染iDC和阴性对照siRNA转染的iDC在体内各淋巴器官分布无显著差异。结论分泌促炎因子尤其是IL-12能力的下降,并进而诱发受体初始T细胞发生Th2极化并大量分泌Th2型细胞因子可能是MyD88基因沉默的iDC诱导移植免疫耐受的重要机制之一。