阪崎克罗诺杆菌表面蛋白的鉴定

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阪崎克罗诺杆菌是近年来在奶粉(乳)制品行业中新发现的一种条件致病菌。它可以感染所有人群,其中,新生儿、早产儿感染该菌后有致命性的危险,主要症状为脑膜炎、败血症及坏死性的小肠结肠炎和系统性脓毒病等。近年来,阪崎克罗诺杆菌的感染率提高很快,目前已引起世界多国相关部门的重视。  表面蛋白是合成后结合到细胞表面的一类蛋白,广泛存在于革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和古细菌的细胞壁表面,在营养吸收、基础代谢、侵入宿主等方面具有重要的功能。由于具有刺激宿主免疫系统的作用,细菌表面蛋白的疫苗性能研究成为致病菌研究的热点问题。此外,表面蛋白具有较好的免疫原性,将是一种有效的候选检测靶标。在阪崎克罗诺杆菌中,除外膜蛋白A研究较为深入外,其它表面蛋白的鉴定与功能研究开展非常少。  针对以上问题,本研究期望对阪崎克罗诺杆菌的表面蛋白进行鉴定,为这一致病菌的溯源、致病机制、控制预防、检测方法的建立等研究奠定基础。本实验根据前期的分型结果,选取5株阪崎克罗诺杆菌22#(IQCC10486)、27#(90505)、29#(ATCC29004)、37#(ENS6607)、50#(ENS07208),利用固定后的菌体免疫新西兰耳大白兔,免疫期间利用间接ELISA方法监测血清效价,从而获得相对应的多克隆抗体;利用试剂盒分别提取5个菌株的膜蛋白并进行脱盐处理,分别做一维电泳和二维双向电泳,以制备的多抗作为一抗进行Western blot检测,用PDquest软件找到胶和膜能完全重合的点,即具有免疫原性的蛋白点,利用MALDI-TOF MS对免疫原性蛋白进行质谱鉴定。利用免疫蛋白质组学的方法,初步鉴定了5株菌中的48种表面蛋白,经过软件预测,包括9种外膜蛋白,2种周质蛋白,2种细胞质膜蛋白,35种细胞质蛋白。5种菌中都鉴定出了外膜蛋白A30S和核糖体蛋白S1;延长因子G和延长因子Tu在4种菌中得到鉴定;分子伴侣GroEL等6种蛋白在3种菌中得到鉴定;热激蛋白90等12种蛋白在2种菌中得到鉴定;蔗糖孔蛋白等26种蛋白仅在一种菌中得到鉴定。这些蛋白的功能和致病机理,需要进一步实验证明。  本研究的开展,为阪崎克罗诺杆菌表面蛋白的鉴定以及致病机制的研究奠定了基础。
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