【摘 要】
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温度是决定作物品质和产量的重要环境因素,我国每年由于冷害都会造成严重的经济损失。油菜是我国主要的经济及油料作物,了解其抗冷机制并通过基因工程手段提高其抗冻能力对于
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温度是决定作物品质和产量的重要环境因素,我国每年由于冷害都会造成严重的经济损失。油菜是我国主要的经济及油料作物,了解其抗冷机制并通过基因工程手段提高其抗冻能力对于增加油菜产量和改善油菜品质意义重大。ICE基因属于bHLH家族,在植物冷信号应答中起重要作用。本论文以拟南芥AtICE1和AtICE2基因序列作为检索序列,在油菜数据库中通过同源序列比对,以油菜“天油8号”为材料克隆出ICE基因在油菜中的同源基因BrICE1和BrICE2,通过转基因(GM)拟南芥对它们的功能进行了研究,主要结果如下:1.克隆到的油菜BrICE1和BrICE2基因含有拟南芥ICE的典型功能结构域和保守基序;RT-PCR鉴定的结果表明油菜ICE基因在GM拟南芥中稳定表达。2.在冷胁迫下,AtICE1、AtICE2、BrICE1和BrICE2的GM拟南芥存活率较野生型更高,表明GM植物的抗冷性强于野生型。3.烟草瞬转的结果表明,AtICE1、AtICE2、BrICE1和BrICE2均定位于细胞核中;GUS染色结果显示,它们在植物叶片、下胚轴以及根部都有表达,且在下胚轴和叶片中的表达强于根部的表达。4.冷胁迫时GM拟南芥的相对电导率和MDA低于野生型,表明GM拟南芥较野生型膜损伤程度轻;冷胁迫下GM拟南芥中H2O2和O2?-的含量低于野生型,且抗氧化酶的含量高于野生型,表明GM拟南芥具有更高效的ROS清除系统;GM拟南芥可以通过积累更多的脯氨酸、可溶性糖及总叶绿素含量参与植物的抗冷性。5.通过实时荧光定量PCR检测结果显示冷胁迫下GM拟南芥中的冷响应基因表达上调,表明油菜ICE基因参与调控冷应答相关基因。
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