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尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是多种植物重要的维管束病害,病原菌多为引起系统性侵染、土壤传播的病害。其多个专化型能引起甘蓝、香蕉、番茄和瓜类等植物的枯萎病,在生产上的危害十分严重。目前利用生物防治来控制病害是安全、有效的措施之一。类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)由于能产生丰富的抗菌物质,是植物病害的有效的生防菌株。本实验是在刘霞初步将Bg1定为类芽孢杆菌属(Paenibacillussp.)工作的基础上开展工作。通过生理生化实验及DNA-DNA杂交等分子生物学技术,确定了生防菌株Bg1的分类地位;对类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)Bg1抗菌蛋白的分离纯化和结构鉴定,明确菌株Bg1对甘蓝枯萎病菌的抑制作用,为明确生防菌株Bg1的抑菌机理提供了理论依据和利用该菌株开发生物农药奠定了基础。通过16SrDNA、ropB基因序列分析和系统进化树分析、G+Cmol%含量测定、与相近菌株的生理生化比较分析、脂肪酸含量测定以及DNA-DNA杂交分析,对类芽孢杆菌Bg1进行了种的鉴定。菌株Bg1与Paenibacillus elgii SD17~T、PaenibacillusehimensisEAG5~T的16SrDNA同源性均为99%;ropB实验结果表明菌株Bg1与P.elgiiSD17~T的同源性为99%,与P.ehimensisEAG5~T同源性为89%;菌株Bg1与P.elgiiSD17~T、P.ehimensisEAG5~T生理生化特征不吻合的项目较多;菌株Bg1的脂肪酸组成与P.elgii SD17~T有四项不一致,而与P.ehimensisEAG5~T有五项不一致;DNA-DNA杂交结果显示菌株Bg1与P.elgii SD17~T有最高基因组相似性,为80.17±2.77%,而与P.ehimensisEAG5~T基因组相似性仅为25±2.68%。综合以上实验结果将菌株Bg1确定为埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)。使用60%硫酸铵沉淀、DEAE-SephadexA50离子交换层析及Sephadex G100凝胶过滤层析对菌株Bg1的抗菌蛋白进行了分离纯化,以SDS-PAGE对该抗菌蛋白进行了纯度检测,以肽质量指纹图谱和MALDI-TOF-TOF-MS/MS对该抗菌蛋白进行了结构鉴定。Bg1无菌发酵滤液经三步纯化后得具有抑菌活性的单一电泳条带蛋白组分,其分子量约10KD。质谱结果表明,Bg1产生的活性蛋白都是一些水解的小分子肽。类芽孢杆菌Bg1主要抗菌活性物质为低分子量抗菌蛋白,其对环境因子稳定性较好,具有进一步开发应用的潜能。使用菌株Bg1的发酵液测定其对甘蓝枯萎病菌(F. oxysporum f. sp. Conglutinans)孢子萌发和生长的影响。通过平板对峙实验,测定菌株Bg1对甘蓝枯萎病菌菌落和菌丝的影响。结果表明,Bg1发酵液对孢子的萌发和菌落的生长均有显著的影响,发酵液有效抑制浓度均为4倍,对孢子的抑制率在88%以上;Bg1菌落与甘蓝枯萎病菌菌落之间形成明显的抑菌条带,且菌株Bg1使甘蓝枯萎病菌菌丝明显的膨大、变形等。在利用抑菌圈法测定菌株Bg1对甘蓝枯萎病菌的抑制实验时,在PDA带菌平板中加入0.001%SDS,探讨SDS对Bg1抑菌物质的影响。结果表明,0.001%SDS几乎能使生防菌株Bg1失去抑菌活性。该实验进一步验证了菌株Bg1的抑菌物质主要是蛋白质或多肽类。