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小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是研究人类多发性硬化(MS)最常用的动物模型,是自身反应性T细胞应答诱导的自身免疫性疾病。MOG35-55诱导的C57BL/6(B6)小鼠EAE模型,具有十分明确的T细胞识别表位,可诱导自身反应性MOG35-55/I-Ab特异性T细胞应答,造成组织损伤。实验室前期研究显示可溶性MOG35-55/I-Ab二聚体对MOG35-55抗原肽诱导的C57BL/6小鼠EAE的发生发展具有抑制作用。本研究中我们选择MOG35-55/I-Ab特异性的TCR转基因小鼠(2D2 Tg小鼠)建立EAE模型,用本室前期构建可溶性MOG35-55/I-Ab二聚体对其进行干预,深入研究可溶性pMHC二聚体抑制自身反应性T细胞及EAE发展进程的机制。结果显示,可溶性MOG35-55/I-Ab二聚体能够抑制2D2Tg小鼠EAE的发生发展。其可能机制为,抑制自身反应性T细胞浸润入CNS和抑制致炎性细胞因子IFNγ和IL-17的分泌及其相应转录因子的表达。论文主要包括两个部分,主要内容与结果如下: 一、MOG35-55诱导的2D2Tg小鼠EAE模型的建立及可溶性MOG35-55/I-Ab 二、聚体的干预作用 抗原肽MOG35-55可诱导2D2Tg小鼠发生严重的EAE,与C57BL/6小鼠的EAE模型相比,2D2 Tg小鼠EAE表现为临床评分增高(3.8±0.5vs.2.9±0.4,P<0.05),发病起始时间与发病高峰时间提早(10.9±0.63vs.13.9±0.63,P<0.05;14.7±1.1vs.20.1±0.18,P<0.05),以及死亡率增高(4/10vs.0/12,P<0.05)。在该模型中应用可溶性MOG35-55/I-Ab二聚体能够改善2D2 Tg小鼠EAE的临床表现(3.8±0.5 vs.1.9±0.5,P<0.05),并提高小鼠生存率(0/5vs.4/10,P<0.05)。 二、可溶性MOG35-55/I-Ab二聚体抑制2D2Tg小鼠EAE发生发展的机制 在诱导的2D2Tg小鼠EAE模型中,检测小鼠脑及脾脏致炎性T细胞的比例及其分泌细胞因子和相关转录因子的情况。结果显示,可溶性MOG35-55/I-Ab二聚体可显著抑制T细胞的脑组织浸润(诱导组45.16%±8.48%vs.干预组10.87%±10.15%,P<0.05),并减少IFNγ+与IL-17+T细胞在脑总单个核细胞的数量,降低脑组织的IFNγ+与IL-17+mRNA水平。 结论及意义可溶性MOG35-55/I-Ab二聚体可通过抑制中枢神经系统T细胞的浸润,并减少IFNγ+与IL-17+T在脑总单个核细胞的数量,从而发挥对EAE的治疗作用。2D2Tg小鼠其大多数T细胞表达MOG35-55/I-Ab特异性TCR有利于追踪MOG特异性致炎性T细胞,为进一步研究MS的发病机制和治疗方法提供手段和基础。