论文部分内容阅读
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一。在我国,胃癌的发病率和病死率目前仍居高不下。胃癌是一种由多因素引起的疾病,对胃癌细胞生物学研究将揭示正常细胞向肿瘤细胞转化过程中细胞的结构和功能的改变以及各种调控机制的作用,为胃癌的预防、诊断和治疗提供理论依据。 有研究表明,外周神经纤维对机体的多种组织器官有支配作用,调控所支配组织发育、分化、成熟和损伤修复。如神经能通过调控免疫细胞在炎症部位聚集,并促进抗原特异性细胞的增殖,来调控免疫功能;神经可以促进纤维母细胞的增殖、分化和迁移,去神经支配的皮肤组织,损伤修复愈合时间明显延长,导致伤口经久不愈。 最新报道在眼部睫状体上皮腺瘤内发现有神经纤维的支配,乳腺癌等肿瘤细胞有神经递质—速激肽的受体表达。这些结论都提示我们:肿瘤可能受神经支配,并且神经可能参与调控肿瘤细胞本身的生物学行为。基于此,我们以SP免疫阳性神经纤维在胃癌组织的分布及其分布特点为线索,探讨人胃癌组织中神经纤维分布的特点以及SP对胃癌细胞生物学 第@零医大管蹲士管佐抢支行为的影响,为进一步地揭示神经纤维在胃癌的发生、发展以及转归过程中的生物学功能奠定基础。 本实验首先应用兔疫组织化学染色方法观察人胃癌组织内的肽能神经纤维(尤其是SP阳性神经纤维)的分布特点。发现了在胃癌组织内存在着大量的肽能神经纤维尤其是 SP免疫阳性神经纤维,这些神经纤维由四周向肿瘤组织内植入并向瘤体的中心部位延伸,走行于肿瘤细胞之间。同时发现胃癌组织内还存有大量的激活型ERKI戊免疫阳性神经纤维,提示神经纤维处于活跃的增生状态;此外,发现有较多神经生长锥样结构也从形态学上说明胃癌组织内存在着神经纤维的再生。 实验二、运用免疫组织化学和兔疫细胞化学染色方法检测胃癌细胞表达NGF和分泌型蛋白Sema 3A的情况:高、低分化胃癌细胞均分泌大量的 NGF;但是神经排斥因子 S驯。3A /q在高分化的胃癌细胞表达。实验结果说明了 NGF和 Sema 3A参与了胃癌组织内神经纤维的再生: 实验三、运用免疫细胞化学方法和Western blot方法发现,胃癌细胞有SP的高亲和力受体NKl的表达。兔疫双标结果显示胃癌组织存在有较多的NK习与激活型ERKI/2共表达的癌细胞。说明胃癌细胞上存在有NK刁受体即SP作用的位点,并且NK习受体与癌细胞内促有丝分裂原转导信号的激活密切相关。 实验四、SP刺激体外培养的胃癌细胞。结果显示SP促进胃癌细胞DNA的合成,并使胃癌细胞对PCNA和激活型ERKI/2的表达增强。实验结果说明SP对胃癌细胞有促增殖作用;其作用的完成是通过与NK-1受体结合并激活细胞内MAPK/ERK信号转导通路。 实验五、利用体外检测肿瘤细胞移动的装置movden chamber)研究SP对胃癌细胞迁移的作用。结果显示SP对低分化的MKN45细胞有化学趋向作用;但对高分化的MKN28胃癌细胞则无作用。 实验六、流式细胞仪检测SP对由5—FU和CHX诱导的胃癌细胞凋亡 5 第@百僵丈学侍士营佰佑支的影响。结果发现:SP对由5—FU和CHX诱导的胃癌细胞凋亡无保护作用。 本课题首次证明了胃癌组织内存在神经支配,并发现胃癌细胞和SP免疫阳性神经纤维之间有互促关系。本课题将为探索实体肿瘤的调控机制提供新的研究思路。