硫酸粘杆菌素菌种选育与发酵工艺研究

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粘菌素又名粘杆菌素、克利斯汀(colistin)、多粘菌素E(Polymyxin E)、抗敌素等,是由多粘杆菌培养液中获得的碱性琐环状多肽类(polypeptide)抗生素,为多粘菌素E1和E2的混合物。为白色结晶或结晶性粉末,微溶于水,不易潮解。其硫酸盐硫酸粘菌素性质十分稳定,为白色粉末,易溶于水,微溶于甲醇、乙醇,不溶于丙酮、乙醚等。在pH值为2—6范围内相当稳定。耐热,消化道不易吸收,排泄迅速、毒性小,无副作用,不易产生耐药菌株,是最安全的畜禽促生长抗生素之一。本课题根据硫酸粘菌素的生物合成特点,运用UV照射、NTG诱变以及抗结构类似物α-氨基丁酸等手段进行菌种选育。研究了以多粘类芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxa)6#作为出发菌株,经过紫外线诱变选育,获得了一株遗传性能稳定且硫酸粘菌素发酵单位比出发菌株提高15%的新菌株37#。然后又对该菌株再采用亚硝基胍(NTG)诱变,以缬氨酸结构类似物氨基丁酸作为筛选因子又得到一株新的产量提高18%的菌株42#,对此新的高产菌株在摇瓶条件下的工艺进行了研究。主要内容包括种子培养时间、接种量、初始pH值、培养温度、碳源、氮源、C/N比等进行优化,确定了优化后的培养基C源为葡萄糖10%与淀粉90%的复合C源,N源为无机N源硫酸铵0.1%与有机N源麦胚粉0.3%相结合的复合N源,C源、N源最佳的比例为2.5:1。种子最佳培养时间为20~24小时,最适宜的接种量为6%,初始pH控制在6.4~6.6最佳。在摇瓶试验的基础上进一步在18吨发酵罐上进行大生产试验。发酵周期固定在40小时的情况下,确定了适宜的通气气比为0.8m3/m3.min、搅拌速度为150rpm,抗生素合成的培养最适温度为33℃。发酵大罐试验结果发酵效价比6#菌株提高33%,体积提高6%,效果良好。
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