【摘 要】
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目的:研究非编码单链RNA(micro RNA,miRNA)miR-370-3P是否通过调控JAK2(Janus kinase2,Janus激酶2)/STAT5B(signal transducer and activator of transcription 5B,信号传导和转录激活因子5B)信号通路进而调节人关节软骨细胞(Human Chondrocytes-articular,HC-a)的增
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目的:研究非编码单链RNA(micro RNA,miRNA)miR-370-3P是否通过调控JAK2(Janus kinase2,Janus激酶2)/STAT5B(signal transducer and activator of transcription 5B,信号传导和转录激活因子5B)信号通路进而调节人关节软骨细胞(Human Chondrocytes-articular,HC-a)的增殖过程,并探讨其潜在作用机制。方法:(1)通过脂质体转染实验构建miR-370-3p过表达/低表达HC-a软骨细胞模型,将细胞分为5组:miR-370-3p mimic模拟物组(miR-370-3p过表达组)、miR-370-3p inhibitor遏制物组(miR-370-3p低表达组)、mNC(mimic normol control,mimic空载体对照组)、iNC(inhibitor normol control,inhibitor空载体对照组)、normol正常对照组,通过miRNA实时荧光定量PCR检测各组miR-370-3p的相对表达量。(2)qRT-PCR(Quantitative real-time polymerase Chain Reaction)检测各组JAK2、STAT5B mRNA的相对表达量。(3)Western blot实验检测JAK2、STAT5B蛋白在各组中的表达水平。(4)MTT比色实验法检测各组HC-a细胞的相对增殖情况。(5)通过双荧光素酶实验检测miR-370-3p与JAK2、STAT5B的结合情况。结果:miRNA实时荧光定量PCR结果提示与正常对照组对比,mimic组miR-370-3p表达量呈上调趋势(P<0.05),inhibitor组miR-370-3p表达为下调(P<0.05),表明miR-370-3p过表达/低表达HC-a软骨细胞模型构建成功;qRT-PCR结果提示相比较于正常对照组,JAK2和STAT5B在mimic组的mRNA相对表达量下调,在inhibitor组上调。(P<0.05),而且空载体对照组和正常对照组之间相比,三组之间的差异没有统计学意义。Western blot实验显示JAK2和STAT5B蛋白在mimic组也有显著下调,在inhibitor组的蛋白表达量增加。MTT实验提示miR-370-3p的过表达会降低HC-a的存活率(P<0.05),提示miR-370-3p的过表达会抑制人关节软骨细胞(HC-a)的增殖。双荧光素酶实验结果显示,miR-370-3p和JAK2-WT(野生型)、STAT5B-WT(野生型)质粒共转染后,荧光表达情况相比于对照组有显著下调,提示miR-370-3p可直接与JAK2-3’UTR、STAT5B-3’UTR直接结合发挥作用。结论:miR-370-3p可通过直接靶向作用于JAK2/STAT5B信号通路进而抑制人关节软骨细胞(HC-a)的增殖。
其他文献
研究背景:不饱和脂肪酸(Unsaturated fatty acids,UFAs),例如w-3和w-6脂肪酸,它们在膜结构,脂质代谢,血液凝结,血压中具有多种作用,并与心血管疾病有关。本课题组研究显示,子痫前期的胎盘组织中,存在着不饱和脂肪酸堆积[1]。然而,目前尚不清楚不饱和脂肪酸对滋养细胞及子痫前期发生的影响及其机制。研究目的:拟通过本课题的研究,明确长链脂肪酸对滋养细胞及子痫前期发生的影响及
目的本研究旨在探讨鼻中隔偏曲(Nasal septum deviation,NSD)患者的术后主客观症状改善水平与术前焦虑抑郁程度是否具有相关性,明确术前的焦虑抑郁是否会对NSD患者的治疗产生影响,为临床提高NSD手术疗效提供参考。方法前瞻性收集2018年9月-2019年12月在重庆医科大学附属第一医院因NSD进行手术的患者资料,包括视觉模拟量表(Visual analogue scale,VAS
脑转移(Brain metastasis,BM)在肺癌(lung cancer,LC)患者中发病率高并导致较高的死亡率。本研究旨在通过一个大型肺癌患者队列来建立脑转移的发病和预后的预测模型。本研究从SEER项目队列中选择2010年至2016年诊断的266522例肺癌病例。分别采用单因素、多因素逻辑回归和Cox回归分析得出脑转移相关的风险因素和预后因素,并利用相关因素构建列线图。用ROC曲线或C指数
目的:脓毒症是导致ICU患者死亡最常见的病因之一,病死率高达30%~50%。脓毒症常常累及肺脏,引起的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)可危及生命,控制炎症瀑布样反应是防治ARDS的重点。MicroRNAs(miRNAs)是多种病理生理过程中的重要调控因子,参与调节细胞周期、分化、凋亡和炎症反应等,近年来研究发现miRNAs在ARDS中发挥重要调节作用。MicroRNA-129-5p(miR-129-
目的本实验通过构建间歇性缺氧大鼠和HT22细胞模型,探讨TGF-β1在间歇性缺氧致大鼠认知功能障碍中的作用及机制。方法体内实验:将12只SD大鼠随机分为对照组(N组)和间歇性缺氧组(IH组),Morris水迷宫评估大鼠认知功能;透射电镜、免疫组织化学观察神经元的自噬改变;蛋白免疫印迹法检测LC3、P62及TGF-β1的表达。体外实验:将小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为对照组(N组)、间歇性缺氧
背景:越来越多的研究表明,生物钟基因PER1在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用。然而,PER1在促进肿瘤发生发展中的生物学功能和机制尚不清楚。目的:通过体外和体内实验探索生物钟基因PER1表达改变对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞糖酵解和增殖的影响及其作用机制。方法:分别建立稳定沉默、过表达和突变PER1的OSCC细胞;用CCK-8
目的:分析子宫内膜间质肉瘤(ESS)患者的临床特点,探讨影响ESS预后的相关因素,加强对该疾病的认识,以期为临床诊疗提供参考。方法:收集2009年06月至2020年03月于重庆医科大学附属第一医院妇科就诊并接受治疗的ESS患者的临床资料,随访其生存情况。回顾性分析我院82例ESS患者的临床病理特征、诊疗方案以及影响ESS预后的相关危险因素。采用统计学软件SPSS 25.0进行数据统计分析,Kapl
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目的评估2018年ASCO/CAP HER2 FISH检测更新指南对于原发性浸润性乳腺癌HER2 FISH结果判读的影响;并探讨不同HER2状态下浸润性乳腺癌的临床病理特征。方法1.回顾性分析2015年1月至2019年10月于重庆医科大学临床病理诊断中心行HER2 FISH与IHC检测的1795例浸润性乳腺癌病例,所有病例HER2 FISH结果均分别使用2013年ASCO/CAP指南与2018年更