沉香是沉香属植物含树脂的心材,具行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效,用于治疗胸腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、肾虚气逆喘急。白木香(Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg)是国产沉香的主要植物来源,为我国特有的珍惜濒危药用植物。白木香野生资源主要分布于海南岛。因伐树结香,目前野生资源已几乎破坏殆尽,早在1998年被列入了《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)附录Ⅱ,1999年被列为国家二级保护植物,2000年列入《世界自然保护联盟受威胁植物红色名录》。为满足国内外市场对沉香药材的大量需求,保护野生资源,改善生产现状,海南和广东南部部分地区从20世纪末就开始大力发展白木香种植,但能提供市场的沉香药材还非常少,优质沉香药材极其匮乏。造成该现状的一个主要的技术瓶颈是：高效、稳定的白木香结香技术没有取得突破,从而难以有针对性地大规模、产业化人工生产沉香药材。本课题组通过白木香结香机理及技术研究,发明了一种通过输液诱导白木香结香的方法。此方法具有结香速度快且整个树体包括枝干均可结香等特点。这一通体结香技术(输液法)在国内外尚未见过报道。本研究主要对这种技术所得沉香的产量和品质进行了初步的评价,比较了产量、浸出物含量、挥发油得率、薄层指纹图谱、挥发油成分等指标,作为评价这一技术应用效果的依据。另外还开展了部分沉香挥发油体外抑菌活性研究。1.GC-MS结合保留指数分析沉香挥发油的化学成分以一份国产沉香挥发油为实验材料,用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术结合Kovats保留指数法对沉香挥发油的成分进行了分析。结果显示,采用GC-MS并结合KI值定性的方法可显著提高芳香精油组分鉴定的准确性。将此方法应用于比较输液法诱导结香的沉香、国产野生沉香以及健康白木香的化学成分差异。结果表明,输液法处理半年得到的沉香在挥发油成分上与野生沉香有很大的相似性,主要以倍半萜为主,健康白木香则以脂肪酸和烷烃类成分为主。说明输液法能够有效促进白木香树木结香。2.沉香挥发油体外抑菌活性的研究比较了不同挥发油溶剂以及抑菌圈实验方法,结果显示DMSO和打孔法适合于沉香挥发油抑菌活性实验。同时研究了沉香挥发油的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果显示沉香挥发油具有一定的抗金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的活性,但对大肠杆菌不敏感。本研究中所涉及的国产沉香挥发油对这三种临床菌种的活性研究属于首次报道。3.通体结香技术诱导白木香结香效果的初步评价选取海口市演丰县白木香种植基地的白木香树,采用了半断杆法、接菌法、火烙法和输液法处理,所有处理统一于2010年8月采收。输液法(已申报专利)选用了10种有机可代谢的化学试剂溶液。纯水输液被用于作为化学试剂输液的对照。对于化学试剂输液的样品,材料收集时测量了结香高度,估算了结香面积,以此用于预测结香量。把所有收集的样品除去白木、阴干后,从浸出物含量、挥发油得率、薄层指纹图谱-显色反应、挥发油成分等水平进行了检测,结果显示化学试剂输液均能够使白木香树结香,而纯水输液处理得到的样品与健康白木香没区别,这说明主要是化学试剂起了促进结香的作用。对于化学试剂输液处理,根据理想模型预测的十种化学试剂处理的结香量为2444.83g-5860.74 g/per tree。所得沉香在浸出物含量上都能够满足药典上不低于10%的要求,挥发油得率均在0.1%以上(均以干燥品量算)。薄层指纹图谱-香草醛显色反应结果显示,输液法所得的沉香成分比较相似,与野生沉香有共同斑点。挥发油成分分析结果显示通体结香技术诱导的沉香在挥发油成分上与国产野生沉香相似,且以倍半萜类化合物为主。以上结果表明,通体结香法诱导的沉香均能够达到药用的要求。而传统的结香方法中,只有火烙法的沉香质量可以达到药用要求,而接菌法以及半断杆法的样品只能在部分指标上合格,尤其浸出物含量不能达到要求。本文中采用的多指标进行沉香品质评价能够为以后建立沉香质量标准提供依据。本文中还用气相色谱法对苄基丙酮、2-(2-苯乙基)色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮进行了定量分析。纯水输液以及健康白木香未检测到这三个成分。通体结香法以及火烙法所得的沉香这三个成分的含量都远远高于野生沉香。两个野生沉香样品都未检测到2-(2-苯乙基)色酮。接菌法所得的沉香未检测到含有苄基丙酮,半断杆法所得沉香未检测到2-(2-苯乙基)色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮。初步猜测苄基丙酮、2-(2-苯乙基)色酮是白木香树体受伤害后的初始合成产物。这些数据能够为以后白木香结香机理研究提供一定的根据。