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目的构建分化成熟的3T3-L1脂肪细胞肥大模型和胰岛素抵抗模型,用小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)技术沉默低密度脂蛋白受体相关蛋白1(low density lipoprotein receptor-related protein1, LRP1),观察载脂蛋白A5(Apolipoprotein A5, ApoA5)的摄取情况,阐明脂肪细胞摄取apoA5的分子机制。方法将体外培养鼠源3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化为成熟的3T3-L1脂肪细胞,分别进行以下实验：(1)建立肥大细胞模型：诱导分化成熟3T3-L1脂肪细胞后换液至第21天；(2)建立胰岛素抵抗细胞模型：用3ng/ml鼠TNF-a孵育成熟的3T3-L1脂肪细胞3天,每天换液；(3)重组人apoA5全长蛋白,并用125I标记,将重组人apoA5干预肥大和胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞模型,通过脉冲追踪实验和WesternBlot检测肥大和胰岛素抵抗的3T3-L1成熟脂肪细胞摄取apoA5的量；(4)分别用不同浓度梯度1nM、5nM、20nM、50nM siRNA沉默LRP1,通过Western Blot检测LRP1沉默效率最佳的siRNA浓度；(5)用最佳siRNA浓度沉默LRP1后,将apoA5干预成熟3T3-L1成熟脂肪细胞,通过脉冲追踪实验和Western Blot检测观察3T3-L1成熟脂肪细胞摄取apoA5的量。结果1、分化成熟的3T3-L1脂肪细胞换液至第21天,用油红O染色可见鲜红色较大脂滴融合,建立肥大细胞模型。2、用3ng/ml鼠TNF-a孵育成熟的3T3-L1脂肪细胞3天,每天换液,建立胰岛素抵抗细胞模型。3、脉冲追踪实验结果显示：和正常3T3-L1脂肪细胞摄取apoA5相比,肥大和胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞使进入细胞内的125I-apoA5分别减少66%和36%(P<0.05)；此外,将apoA5干预肥大和胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞后进行Western Blot检测,结果显示：和正常3T3-L1脂肪细胞摄取apoA5相比,肥大和胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞摄取apoA5分别明显减少85%和52%(P<0.05)。4、分别用不同浓度梯度1nM、5nM、20nM、50nM siRNA沉默3T3-L1成熟脂肪细胞表面LRP1后,通过Western Blot检测到沉默LRP1的最佳siRNA浓度是5nM(沉默效率约为87%)(P<0.05)。5、脉冲追踪实验显示：用终浓度为5nM siRNA沉默3T3-L1成熟脂肪细胞LRP1后,可使进入细胞内的125I-apoA5含量降低了72%(P<0.05)。同样,Western Blot检测发现,预先用5nM siRNA干预可使3T3-L1成熟脂肪细胞摄取apoA5的含量显著减少70%(P<0.05)。结论1、成功建立成熟3T3-L1肥大和胰岛素抵抗脂肪细胞模型。2、在肥大和胰岛素抵抗细胞模型中,3T3-L1脂肪细胞摄取apoA5明显减少。3、3T3-L1脂肪细胞主要是通过LRP1摄取apoA5。