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本实验以苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材,利用RT-PCR法和筛选cDNA文库相结合的方法,分离到了小金海棠超氧化物歧化酶基因全长,进行了原核表达,对时空表达和诱导表达模式进行了深入分析。主要实验结果如下: 1 分离到小金海棠MxSodl基因的全长cDNA序列。序列长826bp,具有完整的开放阅读框,编码152个氨基酸的多肽,推测分子量15kDa。该基因具有CuZn-SOD基因的典型结构域特征。这是苹果属植物中首次克隆到的超氧化物歧化酶基因,在Genbank上的登录号为AY646367。 2 成功构建了原核表达质粒pET30 a(+)-MxSodl,并进行了该基因的原核表达,表达出了约20kDa的融合蛋白条带。 3 通过Southern杂交验证了MxSodl基因在小金海棠基因组中的存在,并证实其为单拷贝基因;另外的杂交实验表明,小金海棠基因组中还存在着与MxSodl同一家族的基因。 4 通过Northern杂交对MxSodl基因在小金海棠中的时空表达模式进行了分析:MxSodl基因在小金海棠各种组织器官中均能得以转录,但转录的水平有所差异。该基因的转录水平随着叶龄增加而逐渐增强。 5 通过模拟干旱处理和盐处理对MxSodl基因的诱导表达模式进行了分析:干旱处理时主要为根和叶中出现该基因表达增强,而盐处理时主要为茎和叶中出现该基因表达增强。 6 在盐胁迫过程中,三种不同抗盐性的苹果属植物MxSodl基因转录都有两次高峰,只是在强弱、出现的时间早晚和延续时间长短上存在差异。抗盐基因型表达强,延续时间长。推测MxSodl 基因在盐胁迫早期的信号转导和后期的盐伤害中都起着重要作用。