【摘 要】
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目的:β1,3半乳糖基转移酶(β3GalT7)是一个新型的人类糖基转移酶,属于β3糖基转移酶大家族。本文旨在对其催化功能进行研究。同时,在此基础上,对该酶与肿瘤的关系进行初步的
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目的:β1,3半乳糖基转移酶(β3GalT7)是一个新型的人类糖基转移酶,属于β3糖基转移酶大家族。本文旨在对其催化功能进行研究。同时,在此基础上,对该酶与肿瘤的关系进行初步的研究。方法:1.将pGEM-T载体中的目的基因亚克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,表达产物复性后用亲和层析柱进行纯化后利用高效液相色谱(HPLC)进行酶活检测。2.克隆β3GalT7编码区的基因并构建其真核真义和反义表达载体,并运用脂质体介导将此重组载体转染中度表达该基因的人SGC7901细胞株,和较高表达β3GalT7的A549细胞株,并通过荧光显微镜,激光共聚焦显微镜,RT-PCR,western印迹等方法对其进行了初步的功能研究。结果:1.HPLC结果表明β3GalT7具有β3GnT糖基转移酶家族的催化活性。2.通过激光共聚焦观察转染了β3GalT7的SGC7901细胞,发现β3GalT7编码的蛋白大部分在胞浆,而核膜上观察到有一小部分。转染了β3GalT7的SGC7901细胞其蛋白表达水平增加, MMP2、MMP14的蛋白表达水平亦有所上升,同时转染了反义β3GalT7的A549细胞其MMP2和MMP14的蛋白表达量随着β3GalT7的被抑制而成正相关下降。结论:初步证明β
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