脑出血发生率、死亡率和致残率均较高，然而动物实验和临床研究均发现，中等量的ICH本身并不引起颅内压的明显升高，因此，血肿周围脑组织水肿和继发性神经元损伤是影响患者预后的主要原因，也是研究的热点。其中脑出血后血肿释放出的凝血酶被认为是导致血肿周围脑细胞水肿、脑细胞凋亡及坏死的关键因素，其机理尚不清楚。 目的 以不同剂量的凝血酶注入SD大鼠尾状核，建立脑水肿模型，采用一系列指标观察不同时相脑水肿，脑细胞凋亡及受损情况，及使用凝血酶抑制剂如水蛭素及钙离子拮抗剂(尼莫地平)是否能减轻凝血酶对脑细胞的毒性作用，是否存在治疗的有效时间。凝血酶致脑水肿及水蛭素，尼莫地平对凝血酶致脑水肿的干预作用的研究国外已有文献报导，但国内尚未见相关报导；凝血酶致神经细胞凋亡的研究在国外刚开展，国内尚属空白；而凝血酶对神经细胞骨架蛋白的影响在国内外均未开展相关研究，是本实验研究的创新之 凝血酶对实验鼠脑细胞毒性损伤机制的研究 摘要 处，将对脑出血后脑水肿及继发性神经元损伤的治疗提供实验室理 论依据。 方 法 立体定位下将不同剂量的凝血酶及不同干预药物注入SD大鼠 尾状核，观察其脑水肿、神经元损伤程度及药物干预效果。 l、用干湿重法及普通光镜（HE染色）观察脑水肿情况。 2、通过免疫组化法观察细胞骨架蛋白（MAP上，Wb200，GFAP） 变化来反映凝血酶对神经元（特别是树突、轴突、胞质细胞突起） 的损伤以及这种损伤是否可逆。 3、通过TUNEL法、电镜观察脑细胞凋亡情况以及凝血酶特异 性抑制剂水蛙素、钙离子桔抗剂（尼莫地平）对上述过程的干预作 用。SD大鼠随机分为6组：l组：生理盐水组；二组：小剂量凝血酶 （l）组；3组：大剂量凝血酶K 组；4组：小剂量凝血酶门） ＋小剂量水蛙素门）组；5组：大剂量凝血酶乃）＋大剂量水蛙 素门 组；6组：尼莫地平组；每组每时相N伙，24k，兆址，3d， 7d）各5支。尼莫地平组在建立模型后即刻给予腹腔注射尼莫地平 50fig门 体重。以后每天注射 1次至实验结束，共一周。 结 果 l、建立动物模型后，4hr、24hr、48hr三个时相点，大剂量凝 血酶组脑含水量与其余各组比P＜0＊，尼莫地平组与其余各组比P 2 凝血酶对实验鼠脑细胞毒性损伤机制的研究 摘要 ＜0．05，大剂量凝血酶组与尼莫地平组比 Ptoo．05，而 3d与 7d二个 时相点6个组组间无明显差异P＞0＊ 根据以上结果提示：大剂量 凝血酶可早期N小时）引起明显脑水肿，其高峰时间为2448小时， 3j大后水肿逐渐消退并趋于正常，而生理盐水、小剂量凝血酶无明 显致水肿作用。凝血酶致脑水肿作用可被特异性抑制剂水蛙素有效 抑制，钙离子抬抗剂尼莫地平早期即能减轻凝血酶致脑水肿作用。 2、大剂量凝血酶早期N小时）即能引起细胞骨架蛋白的变化， 2448小时可进一步导致可逆或不可逆损伤，3至7天则主要造成神 经细胞不可逆损伤即坏死；而生理盐水、小剂量凝血酶无此作用。 水蛙素可桔抗凝血酶的这种作用，而钙离子桔抗剂（尼莫地平）则 能减轻或延缓凝血酶的这种作用：尼莫地平组4hr神经细胞骨架蛋 白无明显变化，2448hr可导致神经细胞可逆性损伤，3至7d则主要 造成神经细胞不可逆损伤。 3、建立动物模型后各时相点大剂量凝血酶组凋亡细胞数与其余 各组比P＜0刀1，尼莫地平组与其余各组比Pwto．05，大剂量凝血酶组 与尼莫地平组比 P＞0刀5，根据以上结果提示：大剂量凝血酶早期N 小时）可导致神经细胞凋亡，其凋亡高峰时间在2448小时，可持续 一周以上，小剂量凝血酶无此变化。水蛙素能特异性抑制凝血酶的作 用，而钙离子桔抗剂可减少或延迟凋亡细胞的出现：凋亡细胞4hr开 始增多，并于以后各时相持续缓慢增加，而始终末达峰值。 结 论 1、大剂量凝血酶可早期Nhr）引起明显脑水肿，其高峰时间 3 凝血酶对实验鼠脑细胞毒性损伤机制的研究