论文部分内容阅读
新生儿生长发育对营养物质有特殊的要求,任何营养素的匮乏对机体的正常生长和器官结构功能的发育都有深远影响,对脑发育的影响尤为重要。早期营养对大脑的结构和功能有着不可逆转的影响,一旦错过大脑发育的关键期,产生的缺陷后天将无法弥补。新生儿期营养素的缺乏会影响其认知功能。 N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acids,Neu5Ac)是人体中最常见的唾液酸。Neu5Ac在人体中普遍存在,在脑组织及母乳中含量较高;唾液酸作用于神经元细胞膜及突触,在神经系统中产生重要作用,例如促进神经细胞的发育、分化,参与突触传递和维持细胞的正常功能,并且在学习与记忆的过程起重要作用。因此,唾液酸对婴幼儿的脑发育有重要意义。本研究以大鼠及孕鼠为实验动物模型进行Neu5Ac干预,通过水迷宫等行为学试验,研究外源性Neu5Ac干预对学习记忆是否有影响。 研究目的:探讨Neu5Ac干预对大鼠及子代鼠学习记忆能力的影响。 研究方法: 一、刚断乳的雄性SD大鼠:将24只刚断乳的雄性SD大鼠,平均体重(92.04±5.74)g,按体重随机分成4组,对照组、低剂量组(10mg/kg Neu5Ac)、中剂量组(20mg/kg Neu5Ac)、高剂量组(40mg/kg Neu5Ac),每组6只,灌胃58d。第60d进行为期4d的Morris水迷宫训练,记录大鼠寻找平台的时间(s)、游泳速度(cm/s)、游泳总路程(cm)、分析搜索策略;第64d撤去平台测试,记录大鼠第一次穿越时间(s)、穿越次数;第66d进行为期4d的穿梭箱试验训练,记录大鼠的电击时间(s);第71d处死实验动物后,取大脑皮层组织并分离海马,用FLD-HPLC方法检测大鼠大脑皮层组织及海马组织Neu5Ac含量;用WesternBlotting方法检测大脑皮层及海马组织ST8SiaⅡ和ST8SiaⅣ的蛋白表达量。 二、SD孕鼠20只,孕15d,按体重随机分成4组,剂量分组同前一部分,每组5只,灌胃至子代鼠27d,期间产后2日内不给予任何处理措施;抽取每组每只母鼠的雄性子代鼠中间体重的两只,分别为子代观察组别,每组各10只。子代鼠第29d进行为期4d的Morris水迷宫训练,记录大鼠寻找平台的时间(s)、游泳速度(cm/s)、游泳总路程(cm)、分析搜索策略;第33d撤去平台测试,记录大鼠第一次穿越时间(s)、穿越次数;第35d进行为期4d的穿梭箱试验训练,记录大鼠的电击时间(s);第40d处死实验动物后,取大脑皮层组织并分离海马,用FLD-HPLC方法检测大鼠大脑皮层组织及海马组织Neu5Ac含量;用WesternBlotting方法检测大脑皮层及海马组织ST8SiaⅡ和ST8SiaⅣ的蛋白表达量。 三、计量资料采用方差分析,进行方差齐性检验;寻找平台时间、游泳速度、电击时间等资料采用重复测量方差分析;假设检验的概率水准α=0.05。 研究结果: 一、刚断乳的雄性SD大鼠:(1) Neu5Ac干预对刚断乳的雄性SD大鼠体重及脑重未见影响;(2)水迷宫结果显示,训练期间从低剂量组到高剂量组与对照组的寻找平台时间、游泳速度、游泳总路程的差异无统计学意义(P>0.05);第5d测试,对照组及从低剂量组到高剂量组的平均第一次穿越时间(s)依次为17.44±11.20、17.64±15.46、27.56±12.30、19.12±12.08,各组之间的差异无统计学意义(P>0.05);(3)穿梭箱结果显示,从训练第1d到第5d对各组间的电击时间的差异无统计学意义(P>0.05);(4)对照组及从低剂量组到高剂量组的大脑皮层组织Neu5Ae含量(mg/g)依次为:4.87±1.19、5.59±0.08、5.82±1.04、4.39±1.25,差异无统计学意义(P>0.05);(5)对照组及从低剂量组到高剂量组的海马组织Neu5Ac含量(mg/g)依次为:4.90±0.40、5.71±0.60、5.95±0.41、5.20±0.52,差异无统计学意义(P>0.05);(6)对照组及从低剂量组到高剂量组的大脑皮层组织ST8SiaⅡ蛋白表达量依次为:0.61±0.27、0.45±0.30、0.65±0.09、0.70±0.23,差异无统计学意义(P>0.05);(7)对照组及从低剂量组到高剂量组的海马组织ST8SiaⅡ蛋白表达量依次为:0.57±0.19、0.62±0.14、0.51±0.13、0.68±0.32,差异无统计学意义(P>0.05);(8)对照组及从低剂量组到高剂量组的大脑皮层组织ST8SiaⅣ蛋白表达量依次为:0.56±0.31、0.49±0.19、0.63±0.25、0.55±0.32,差异无统计学意义(P>0.05);(9)对照组及从低剂量组到高剂量组的海马组织ST8SiaⅣ蛋白表达量依次为:0.61±0.27、0.47±0.13、0.57±0.18、0.59±0.31,差异无统计学意义(P>0.05)。 二、SD雄性子代鼠:(1)Neu5Ac干预对子代鼠的体重及脑重未见影响;(2)水迷宫结果显示,训练第1d,对照组、从低剂量组到高剂量组的寻找平台的时间(s)依次为82.03±28.38、69.18±24、62、66.46±27.63、67.26±25.89,处理组的时间明显低于对照组(P<0.05);训练第4d,对照组、从低剂量组到高剂量组的寻找平台的时间(s)依次为56.78±27.10、51.09±29.36、50.06±29.54、46.80±24.65,处理组的时间明显低于对照组(P<0.05),且随剂量的增加而有逐渐减少趋势;第5d测试,对照组、从低剂量组到高剂量组的第一次穿越时间(s)依次为:41.37±6.77、28.33±5.16、19.56±12.30、11.12±12.08,处理组的时间明显低于对照组(P<0.05),且随剂量的增加有逐渐减少趋势;(3)穿梭箱结果显示:训练第1d,对照组及从低剂量组到高剂量组的电击时间(s)依次为:94.57±11.41、76.39±19.45、77.18±19.31、75.62±23.07,处理组的电击时间明显低于对照组(P<0.05);训练第4d,对照组及从低剂量组到高剂量组的电击时间(s)依次为:69.45±14.28、57.84±17.55、51.49±27.46、55.13±14.25,处理组的电击时间明显低于对照组(P<0.05);(4)对照组及从低剂量组到高剂量组的大脑皮层组织Neu5Ac含量(mg/g)依次为:1.79±0.75、2.64±0.90、3.57±0.79、3.96±1.38,处理组的含量明显高于对照组(P<0.05),且随着剂量的增加而有逐渐增高趋势;(5)对照组及从低剂量组到高剂量组的海马组织Neu5Ac含量(mg/g)依次为:2.34±0.61、3.44±1.03、3.79±1.26、4.61±2.04,处理组的含量明显高于对照组(P<0.05),且随着剂量的增加而有逐渐增高趋势;(6)对照组及从低剂量组到高剂量组的大脑皮层组织ST8SiaⅡ表达量依次为:0.27±0.11、0.41±0.13、0.85±0.25、0.64±0.07(P<0.05),对照组海马组织ST8SiaⅡ表达量低于从低剂量组到高剂量组(P<0.05);(7)对照组及从低剂量组到高剂量组的海马组织ST8SiaⅡ表达量依次为:0.31±0.08、0.51±0.37、0.78±0.29、0.74±0.40,对照组海马组织ST8SiaⅡ表达量低于从低剂量组到高剂量组(P<0.05);(8)对照组及从低剂量组到高剂量组的大脑皮层组织ST8SiaⅣ表达量依次为:0.32±0.06,0.48±0.18,0.67±0.26,0.76±0.21(P<0.05),对照组海马组织ST8SiaⅣ表达量低于从低剂量组到高剂量组(P<0.05);(9)对照组及从低剂量组到高剂量组的海马组织ST8SiaⅣ表达量依次为:0.37±0.11、0.63±0.27、0.75±0.40、0.81±0.39,对照组海马组织ST8SiaⅣ表达量低于从低剂量组到高剂量组(P<0.05)。 实验结论: 对SD孕鼠进行Neu5Ac干预,其对子代鼠的学习记忆能力有促进作用,且可以改变子代鼠中脑组织的Neu5Ac含量;因此我们推论孕期及哺乳期,Neu5Ac可能通过血液透过胎盘、增加乳汁中Neu5Ac的含量,进而对子代鼠中脑组织中Neu5Ac的含量产生影响,导致增强脑内ST8SiaⅡ和ST8SiaⅣ酶的表达,最终对子代鼠的学习记忆能力产生影响。而并未发现Neu5Ac干预入对刚断乳的SD雄性大鼠学习记忆能力有影响,说明Neu5Ac仅在脑发育的关键期会对学习记忆有促进作用,但是在脑发育成熟时,Neu5Ac对学习记忆能力并无明显影响。