研究目的： 对β淀粉样蛋白的神经元毒性作用、β淀粉样蛋白活化诱导小胶质细胞分泌炎性细胞因子和自由基一氧化氮的作用进行研究，探讨β淀粉样蛋白及活化后小胶质细胞的神经元毒性作用机制，并对非甾体类抗炎药吲哚美辛的神经元保护作用进行初步研究，为阿尔茨海默病的炎性反应机制及抗炎治疗提供体外依据。 研究方法： 1．应用神经生长因子(NGF)分化的PC12细胞作为体外神经元模型，高度纯化的BV-2小胶质细胞作为体外小胶质细胞模型，观察加入Aβ后细胞形态学及细胞活性改变。 2．RT-PCR法观察IL-1β对神经元APP mRNA及Aβ对BV-2细胞IL-1β、iNOS mRNA表达的影响；放射免疫法测定加入Aβ后BV-2细胞上清IL-1β及IL-6水平；测定加入Aβ后BV-2细胞上清NO含量及细胞iNOS酶活力；Western blot法、流式细胞仪间接免疫荧光标记法测定Aβ对BV-2细胞iNOS蛋白表达的影响，并应用免疫细胞化学方法对iNOS蛋白的表达情况进行观察。 3．观察非甾体类抗炎药吲哚美辛的神经元保护作用、对神经元APP mRNA表达及小胶质细胞表达、分泌IL-1β和NO的拮抗作用。 结果： 1．在体外Aβ1-42和Aβ25-35对神经元有类似的细胞毒性作用，随着浓度的增加、作用时间的延长该毒性作用也随之增加，并且与聚集状态相关。解放军总医院/军医进修学院博士学位论文中文摘要 2.工L一ID不仅可以扩大A日的细胞毒性作用，还以时间及剂量依赖方式刺激神经元APP mRNA表达增加。 3.Ap对BV一2细胞的生存活性没有影响，在较低浓度时A日1一42就可以使BV一2细胞形态发生变化，与孵育状态有关。A p 25一35无此作用。 4.A pl一42及A p 25一35均可使BV一2细胞释放IL一lp增加，并在mRNA水平以时间及剂量依赖方式进行调控。与Ap聚集状态无关。 5.A pl一 42可以刺激BV一2细胞产生大量NO、提高BV一2细胞iNOS酶活性、增加iNOS mRNA以及蛋白质表达，均具有时间及剂量依赖性。A p 25一35无上述作用。 6.叫睬美辛可部分抑制Ap的毒性作用;下调IL一lp对PC12细胞A即基因表达的调节作用;在mRNA及蛋白质水平抑制BV一2细胞对IL一lp及NO的表达及分泌，阻断炎症级联放大机制，从而起到神经元保护作用。结论: 1.Ap在体外具有直接神经元毒性作用;并可通过活化小胶质细胞，增加炎性细胞因子及自由基NO的表达及分泌，为介导炎性级联反应、进一步发挥神经元毒性作用创造条件。 2.叫睬美辛可以部分抑制Ap的直接神经元毒性、减少小胶质细胞对工L一1p及N0的表达及分泌，从而阻断炎症级联放大机制，起到神经元保护作用。 3.Ap的神经毒性作用与炎性反应及小胶质细胞密切相关，值得深入研究。而作为一种简便、易得、高效的体外模型，高度纯化的BV一2小胶质细胞对AD的体外研究具有重要应用价值。本研究创新点: 1.在国内较早应用体外模型对Ap活化小胶质细胞及相关神经元毒性作解放军总医院/军医进修学院博士学位论文中文摘要用机制进行研究，为AD炎性反应的相关性及抗炎治疗的有效性进一步提供了体外依据。 2.发现在体外低浓度Ap即可激活BV一2细胞，使之形态学发生改变;在浓度增加后可使之分泌炎性细胞因子以及自由基NO，与传统认为的小胶质细胞激活反应形式不完全一致。 3.发现除抑制环氧合酶(COX)外，非幽体类抗炎药叫噪美辛还可通过抑制小胶质细胞合成及分泌炎性细胞因子以及N0来起到神经元保护作用。 4.在国内首次应用 BV一2细胞株作为体外小胶质细胞模型进行AD的炎症相关性研究，对掌握该细胞株对Ap的反应特性提供了相应的实验室资料。