论文部分内容阅读
连翘具有清热解毒、消肿散结之功效,临床上广泛用于对呼吸系统炎症、发热等病症,现代药理学研究表明抗炎作用是连翘清热解毒、消肿散结的主要药理活性。根据采收期不同,连翘分为青翘和老翘,文献报道青翘乙酸乙酯部位具有较好的抗炎活性,连翘苷、连翘脂素等可以通过多种途径发挥抗炎作用。中药发挥药效通常是多种成分、多靶点协同作用,谱效关系研究将中药化学成分指纹图谱与药效结果进行关联筛选有效成分。为筛选青翘抗炎活性成分,建立青翘抗炎质量控制方法,本论文以不同产地青翘药材为研究对象,建立HPLC指纹图谱,进行体外抗炎活性研究,构建抗炎谱效关系,筛选潜在活性成分并建立多指标成分含量测定方法,为完善青翘药材质量评价提供依据。目的:建立青翘HPLC指纹图谱,研究其体外抗炎谱效关系,筛选潜在的抗炎活性成分;在此基础上,建立青翘多指标成分质量评价方法。方法:收集不同产地青翘药材,筛选优化指纹图谱条件,建立青翘HPLC指纹图谱,结合HPLC-Q-TOF/MS鉴定青翘中化合物成分;采用脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症模型,考察16批青翘药材对RAW264.7炎症细胞NO、TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子的影响,通过多元线性回归分析和灰色关联度分析进行谱效关联,建立抗炎谱效关系,筛选青翘抗炎活性成分;在此基础上,选取四种抗炎活性较好的指标性成分建立青翘多指标成分质量评价方法。结果:1.不同产地青翘指纹图谱的建立优化得到青翘HPLC指纹图谱,精密度、重复性、稳定性RSD值均小于3%,表明该方法可靠,可用于青翘指纹图谱研究;相似度评价结果表明16批不同产地的青翘药材相似度在89%以上;16个共有峰峰面积RSD值在25%~160%之间;HPLC-Q-TOF/MS鉴定出21个化合物,分别是对羟基苯乙酸甲酯、奎宁酸、Cornoside、3,4-二羟基苯乙醇苷、五福花苷酸、连翘酯苷E、对-香豆素-(6-O-咖啡酰基)-葡萄糖苷、β-羟基连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘酯苷J、连翘酯苷F、连翘酯苷A、芦丁、连翘酯苷H、(+)-表松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、(+)-松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、牛蒡子苷元、连翘苷、连翘脂素、异落叶松脂素、罗汉松脂素。2.青翘抗炎谱效关系研究及抗炎活性成分筛选釆用LPS刺激RAW264.7建立体外细胞炎症模型,以炎症因子NO、IL-1β、IL-6和TNF-α含量为检测指标,对不同产地16批青翘药材进行体外抗炎活性研究。通过多元线性回归分析和灰色关联度分析筛选出11个具有抗炎活性的共有峰,经标准品指认和质谱鉴定,确定连翘酯苷E、连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷、Cornoside、对-香豆素-(6-O-咖啡酰基)-葡萄糖苷、连翘酯苷H、(+)-表松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、(+)-松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷9种抗炎活性成分。3.青翘多指标成分含量测定方法的建立与评价建立了以连翘酯苷E、连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷4种抗炎成分为指标的含量测定方法,线性范围良好,本方法灵敏度高,重复性好,可靠性强,可用于青翘的质量评价。结论:1.青翘HPLC指纹图谱准确可靠,可从整体反映青翘质量。2.通过体外抗炎谱效关系研究,筛选并鉴定出9种青翘发挥抗炎药效的活性成分。3.以青翘主要抗炎成分建立的多指标成分含量测定方法稳定可靠,重现性良好,为青翘的质量控制与评价提供了依据。