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目的 观察正常卵巢和卵巢良、恶性病变中抑癌基因PTEN突变和表达以及肿瘤相关基因PTEN、nm23H1、VEGF165、Tiam1、MMP-2、TIMP-2、HE4、S100A4、和管家基因β-actin、GAPDH的表达,比较其表达或突变与卵巢癌临床病理特征的关系,探索PTEN及肿瘤相关基因在卵巢癌发生和侵袭中作用及相关分子机理,为卵巢癌的基因诊断寻找便捷途径。 实验方法 1.采用PCR-SSCP和PV9000二步免疫组化法分别检测95例卵巢恶性肿瘤、19例卵巢交界性肿瘤、10例正常卵巢、10例卵巢囊肿组织中PTEN蛋白表达和外显子5的突变。比较PTEN基因突变和蛋白表达与卵巢恶性肿瘤临床病理特征的关系。 2.应用RT-PCR方法检测正常卵巢(n=5)、上皮来源卵巢囊肿(n=5)、卵巢交界性肿瘤(n:9)、卵巢癌(n=60)中PTEN和VEGF165基因mR-NA表达,探讨其与卵巢癌临床病理特征的关系,并分析二者表达的相关性。 3.采用cDNA芯片检测技术,检测肿瘤相关基因PTEN、nm23H1、VEGF165、Tiam1、MMP-2、TIMP-2、HE4、S100A4、和管家基因β-actin、GAPDH在正常卵巢(n=5)和卵巢癌(n=20)中表达谱差异,比较其表达与卵巢癌临床病理特征的关系。 实验结果 1.卵巢交界性和卵巢恶性肿瘤中PTEN蛋白表达显著低于正常卵巢或卵巢囊肿(P<0.05);PTEN蛋白表达与卵巢恶性肿瘤组织分化程度呈正相关(P<0.01),与临床病理分期和淋巴结转移负相关(P<0.05,P<0.01);在上皮来源卵巢恶性肿瘤中子宫内膜样癌PTEN蛋白表达最低(P<0.01)。 2二在原发性卵巢癌组织中发现5例(6.6%),在转移性卵巢癌组织中发现1例(11 .1%)Pl下N基因外显子5突变。 3.PTEN基因mRNA在卵巢交界性肿瘤和卵巢癌组织中的表达水平低于正常卵巢或卵巢囊肿(P<0.01),与卵巢癌的临床病理分期呈负相关(P<0.01),而与组织分化程度呈正相关(P<0.01)。在卵巢内膜样癌中PIEN基因mRNA表达水平显著低于浆液性和翁液性卵巢囊腺癌(P<0.01)。VEGF:65基因mRNA在卵巢癌组织中的表达水平高于正常卵巢或卵巢囊肿(P<0.01),与卵巢癌的临床病理分期呈正相关(P<0.01),而与组织分化程度呈负相关(P<0.01);浆液性卵巢癌中VEcF165基因功RNA表达水平显著高于其它卵巢上皮性恶性肿瘤(P<0.01)。VEGF165基因mRNA随Pl下N基因mRNA表达的降低而升高(P<0.01)。 4.肿瘤相关基因班冤N、TIMP一2和n比I23H;cDNA在卵巢癌组织中表达下调,表达下调的上述基因与卵巢癌临床病理分期和淋巴结转移呈负相关(P<0.01),而与组织分化程度呈正相关(P<0.01)。Tiaml,VEGFI“,MMP一2,HE4和SlooA4 cDNA在卵巢癌组织中表达上调,且1枉讲基因表达上调的最为明显;表达上调的上述基因与卵巢癌临床病理分期和淋巴结转移呈正相关(P<0.01),而与组织分化程度呈负相关(P<0.01)。管家基因日一actin和GAPDH在正常卵巢和卵巢癌组织中表达无明显差异。结论 1.卵巢恶性肿瘤中存在低频率的PrEN基因外显子5突变和高频率的P几N蛋白表达下调。P理N蛋白表达下调与卵巢恶性肿瘤的组织分化程度、临床病理分期和转移能力相关,与卵巢癌中的子宫内膜样癌Pl宽N蛋白表达关系更为密切。 2.在卵巢癌组织中Pl下N基因mRNA表达下调和V’EGF165基因mRNA表达上调是卵巢癌发生的重要分子事件,可作为反映卵巢癌病理生物学行为的指标,且分别与卵巢内膜样癌和浆液性囊腺癌的发生和病理生物学行为关系密切;利阻N基因mRNA表达降低可能通过上调VEGF.基因mRNA表达促进新生血管形成,进而参与卵巢癌的发生和侵袭。 3.肿瘤相关基因PrEN、n功a3H:、VEGFI“、Tiamx、M柳一2、皿MP一2、HE4和SlooA4与卵巢癌发生及侵袭关系密切。cDNA基因芯片技术能够·2·快速、平行检测多个肿瘤相关基因的改变,对于探讨卵巢癌发生和转移的分子机制,寻找卵巢癌特异分子标志物具有重要意义。