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研究目的：本课题根据“癌毒学说”,旨在研究杉蟾藤复方成分对肺癌细胞增殖和凋亡的影响,对凋亡相关蛋白的调控作用以及对肺癌细胞形态学的影响,以初步探讨杉蟾藤复方抗肺癌的有效作用机制。研究方法：1、采用MTT法分别检测红豆杉单体、蟾皮单体、雷公藤单体对A549细胞及NCI-H1688细胞的抑制增殖作用,比较其抗癌活性。2、流式细胞仪检测凋亡,观察红豆杉单体、蟾皮单体、雷公藤单体作用于A549细胞及NCI-H1688细胞24h后对细胞周期的影响。3、免疫组化法检测杉蟾藤复方成分对肺癌细胞相关蛋白Bad、Bax、Bcl-2蛋白调控的影响。4、透射电镜观察体外对A549细胞及NCI-H1688细胞形态学的影响以及观察是否出现凋亡小体、核染色质固缩、边集等现象。5、激光共聚焦显微镜观察杉蟾藤复方成分作用于A549细胞及NCI-H1688细胞的变化。研究结果：1、药物作用细胞24、48小时后,与空白对照组相比,不同浓度和作用时间的三种单体对A549细胞及NCI-H1688细胞均具有明显生长抑制作用(P<0.05),尤其高剂量组的抑制作用显著(P<0.01),且在同一浓度水平,随着作用时间的延长,三种单体对A549细胞及NCI-H1688细胞的生长抑制作用呈递增态势。2、A549细胞和NCI-H1688细胞经过不同剂量的三种单体处理48h后,各剂量组均出现不同程度的凋亡,且细胞的凋亡比例在早、中晚期均呈现出随剂量增高而增长的态势。各剂量组细胞的总凋亡率与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3、免疫组化显示抑凋亡Bcl-2蛋白表达减弱,总Bax蛋白／Bcl-2蛋白上升,促凋亡Bad蛋白表达增强；抑凋亡基因Bcl-2mRNA表达下调,总Bax mRNA/Bcl-2mRNA上升,促凋亡Bad mRNA表达上调。4、透射电镜观察显示：三种单体作用A549细胞及NCI-H1688细胞48h后发生体积皱缩,细胞膜不完整,核膜消失,核质萎缩、碎裂,个别形成凋亡小体；部分染色质固缩,沿核膜形成数个团块状边集；细胞器肿胀,空泡状明显增多。正常对照组细胞膜表面光滑、完整,可见微绒毛,胞质密度高,无空泡,核内染色质分布均匀、核仁大较完整,居中或边移；线粒体脊断裂或消失。5、、激光共聚焦显微镜观察到杉蟾藤复方成分作用与A549细胞和NCI-H1688细胞后,均出现不同程度的磷酯酰丝氨酸外翻,细胞发生早期凋亡现象。研究结论：1、杉蟾藤复方成分(红豆杉单体、蟾皮单体、雷公藤单体)体外对肺腺癌A549细胞及小细胞肺癌NCI-H1688细胞均具有抑制增殖作用,且抑制率水平具有浓度和时间的依赖性。2、杉蟾藤复方成分能够诱导A549细胞和NCI-H1688细胞发生凋亡,并引起细胞发生相应的形态学改变。3、杉蟾藤复方成分调控蛋白诱导A549细胞和NCI-H1688细胞发生凋亡的机制也可能与调控Bcl-2家族的Bax、Bcl-2、Bad蛋白以及Bax mRNA、Bcl-2mRNA、Bad mRNA的综合表达有关。