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目的:通过体外细胞实验初步探讨胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)对胶质瘤化疗耐药的影响,证明GSCs的存在是胶质瘤耐药的重要因素之一。
方法:将三株胶质瘤细胞株SHG-44、LJ251、U87MG分别接种于含有生长因子的无血清培养基,通过无血清悬浮培养法筛选含有大量GSCs的干细胞球并分离;鉴定GSCs用RT-PCR法检测胶质瘤干细胞的GFAP、CD133 mRNA的表达;扫描电镜观察GSCs的形态;比较三株GSCs倍增曲线;CCK8法检测化疗药物作用时间、浓度变化对胶质瘤细胞及其干细胞增殖活性及生长抑制率的影响。
结果:从三株胶质瘤细胞中分离出的GSCs,可在体外增殖及传代,倍增时间分别为:140h、150h、160h,并表达特异性标志物CD133。顺铂及长春新碱对胶质瘤及其干细胞均有抑制作用,呈浓度、剂量依赖性,且剂量效应关系显著。胶质瘤干细胞组细胞抑制率明显低于胶质瘤细胞组(P均<0.01)。顺铂干预胶质瘤及其干细胞时间不同(24h,48h),细胞抑制率强弱顺序在GSCs类型上有所不同。而长春新碱干预时间长短对胶质瘤细胞及其干细胞细胞抑制率强弱顺序无明显影响。
结论:CD133可作为GSCs鉴定的标志物及预测预后的指标之一;GSCs有自我更新和增殖能力;GSCs对化疗药物(顺铂、长春新碱)明显耐药,是导致胶质瘤耐药的重要因素之一;CCK8法可作为检测GSCs化疗药物的敏感性的筛选方法;U251及U251-GSCs对顺铂较敏感,SHG44及SHG44-GSCs对长春新碱较敏感,U87MG及U87MG-GSCs对顺铂及长春新碱均耐药。